CHO HCP ELISA ಕಿಟ್
ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಒಂದು-ಹಂತದ ಇಮ್ಯುನೊಸಾರ್ಬೆಂಟ್ ELISA ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.CHOK1 HCP ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳು ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ HRP-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿದ ಮೇಕೆ ವಿರೋಧಿ CHOK1 ಪ್ರತಿಕಾಯ ಮತ್ತು ELISA ಪ್ಲೇಟ್ನಲ್ಲಿ ಲೇಪಿತವಾದ CHOK1 ವಿರೋಧಿ ಪ್ರತಿಕಾಯದೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುತ್ತವೆ, ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಘನ-ಹಂತದ ಪ್ರತಿಕಾಯ-HCP-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿದ ಪ್ರತಿಕಾಯದ ಸ್ಯಾಂಡ್ವಿಚ್ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ.ELISA ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತೊಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ಅನ್ಬೌಂಡ್ ಪ್ರತಿಜನಕ-ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು.ಸಾಕಷ್ಟು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಾಗಿ TMB ತಲಾಧಾರವನ್ನು ಬಾವಿಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಸ್ಟಾಪ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ ಬಣ್ಣ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 450/650nm ನಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರದ OD ಅಥವಾ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ನೊಂದಿಗೆ ಓದಲಾಗುತ್ತದೆ.OD ಮೌಲ್ಯ ಅಥವಾ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೌಲ್ಯವು ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿನ HCP ವಿಷಯಕ್ಕೆ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿರುತ್ತದೆ.ಇದರಿಂದ, ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿನ HCP ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ಪ್ರಕಾರ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಬಹುದು.
ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್
ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ CHOK1 ಹೋಸ್ಟ್ ಸೆಲ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅವಶೇಷಗಳ ವಿಷಯವನ್ನು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಈ ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
Cವಿರೋಧಿಗಳು
ಎಸ್/ಎನ್ | ಘಟಕ | ಏಕಾಗ್ರತೆ | ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು |
1 | CHOK1 HCP ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ | 0.5mg/mL | ≤-20℃ |
2 | ವಿರೋಧಿ CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤-20℃, ಬೆಳಕಿನಿಂದ ರಕ್ಷಿಸಿ |
3 | TMB | NA | 2-8℃, ಬೆಳಕಿನಿಂದ ರಕ್ಷಿಸಿ |
4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
5 | ಪರಿಹಾರವನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಿ | NA | RT |
6 | ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲರ್ಗಳು | NA | RT |
7 | ಬಿಎಸ್ಎ | NA | 2-8℃ |
8 | ಹೆಚ್ಚಿನ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆ ಪೂರ್ವ ಲೇಪನ ಫಲಕಗಳು | NA | 2-8℃ |
ಸಲಕರಣೆ ಅಗತ್ಯವಿದೆ
ಉಪಭೋಗ್ಯ/ಉಪಕರಣಗಳು | ತಯಾರಿಕೆ | ಕ್ಯಾಟಲಾಗ್ |
ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ | ಆಣ್ವಿಕ ಸಾಧನಗಳು | ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಾ ಮ್ಯಾಕ್ಸ್ M5, M5e, ಅಥವಾ ಸಮಾನ |
ಥರ್ಮೋಮಿಕ್ಸರ್ | ಎಪ್ಪೆಂಡಾರ್ಫ್ | Eppendorf/5355, ಅಥವಾ ಸಮಾನ |
ಸುಳಿಯ ಮಿಕ್ಸರ್ | IKA | MS3 ಡಿಜಿಟಲ್, ಅಥವಾ ಸಮಾನ |
ಶೇಖರಣೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆ
1.-25~-15°C ನಲ್ಲಿ ಸಾರಿಗೆ.
2.ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಕೋಷ್ಟಕ 1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ;1-2 ಘಟಕಗಳನ್ನು ≤–20°C, 5-6 ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ RT,3、4,7,8 ಅನ್ನು 2-8℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ;ಮಾನ್ಯತೆಯ ಅವಧಿಯು 12 ತಿಂಗಳುಗಳು.
ಉತ್ಪನ್ನ ನಿಯತಾಂಕಗಳು
1.ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ: 1ng/mL
2.ಪತ್ತೆ ವ್ಯಾಪ್ತಿ: 3- 100ng/mL
3.ನಿಖರತೆ: ಇಂಟ್ರಾ-ಅಸ್ಸೇ CV≤ 10%, ಅಂತರ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ CV≤ 15%
4.HCP ವ್ಯಾಪ್ತಿ: >80%
5.ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ: ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಿಂದ ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿ CHOK1 HCP ಯೊಂದಿಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುವುದರಿಂದ ಈ ಕಿಟ್ ಸಾರ್ವತ್ರಿಕವಾಗಿದೆ.
ಕಾರಕ ತಯಾರಿಕೆ
1.PBST 0.05%
15 ಮಿಲಿ 20×PBST 0.05% ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ, ddH ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ2O, ಮತ್ತು 300 ಮಿಲಿ ವರೆಗೆ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
2.1.0% BSA
ಬಾಟಲಿಯಿಂದ 1g BSA ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಂಡು 100 ml PBST 0.05% ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ, ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗುವ ತನಕ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 2-8 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಬಫರ್ 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಮಾನ್ಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಅಗತ್ಯವಿರುವಂತೆ ತಯಾರಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
3.ಪತ್ತೆ ಪರಿಹಾರ 2μg/mL
48μL 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು 2μg/mL ಪತ್ತೆ ಪರಿಹಾರದ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು 1% BSA ನ 11,952μL ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ.
4.QC ಮತ್ತು CHOK1 HCP ಮಾನದಂಡಗಳ ತಯಾರಿ
ಕೊಳವೆ ಸಂ. | ಮೂಲ | ಏಕಾಗ್ರತೆ | ಸಂಪುಟ | 1% BSA | ಒಟ್ಟು ಪರಿಮಾಣ | ಅಂತಿಮ |
A | ಪ್ರಮಾಣಿತ | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
ಕೋಷ್ಟಕ: QC ಮತ್ತು ಮಾನದಂಡಗಳ ತಯಾರಿಕೆ
ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ
1.ಮೇಲಿನ "ಕಾರಕ ತಯಾರಿ" ಯಲ್ಲಿ ಸೂಚಿಸಿದಂತೆ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ.
2.ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 50μL ಮಾನದಂಡಗಳು, ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು QC ಗಳನ್ನು (ಟೇಬಲ್ 3 ಅನ್ನು ನೋಡಿ) ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ, ನಂತರ 100μL ಪತ್ತೆ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (2μg/mL);ಸೀಲರ್ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಕವರ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ELISA ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಥರ್ಮೋಮಿಕ್ಸರ್ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 500rpm, 25±3℃ ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ.
3.ಸಿಂಕ್ನಲ್ಲಿ ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತಿರುಗಿಸಿ ಮತ್ತು ಲೇಪನ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿ.ELISA ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತೊಳೆಯಲು ಮತ್ತು ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತಿರಸ್ಕರಿಸಲು ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ PBST 0.05% ನ ಪೈಪೆಟ್ 300μL ಮತ್ತು ತೊಳೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು 3 ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಿ.ಕ್ಲೀನ್ ಪೇಪರ್ ಟವೆಲ್ ಮೇಲೆ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತಿರುಗಿಸಿ ಮತ್ತು ಒಣಗಿಸಿ.
4.ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 100μL of TMB ತಲಾಧಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (ಟೇಬಲ್ 1 ನೋಡಿ) ELISA ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಮುಚ್ಚಿ ಮತ್ತು 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 25±3℃ ನಲ್ಲಿ ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ.
5.ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 100μL ಸ್ಟಾಪ್ ಪರಿಹಾರದ ಪೈಪೆಟ್.
6.ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ನೊಂದಿಗೆ 450/650nm ತರಂಗಾಂತರದಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ.
7.ಸಾಫ್ಟ್ಮ್ಯಾಕ್ಸ್ ಅಥವಾ ತತ್ಸಮಾನ ಸಾಫ್ಟ್ವೇರ್ ಮೂಲಕ ಡೇಟಾವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿ.ನಾಲ್ಕು-ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್ ಲಾಜಿಸ್ಟಿಕ್ ರಿಗ್ರೆಷನ್ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸಿ.
ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಕರ್ವ್ ಉದಾಹರಣೆ
ಗಮನಿಸಿ: ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ HCP ಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ನ ಮೇಲಿನ ಮಿತಿಯನ್ನು ಮೀರಿದರೆ, ಅದನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸುವ ಮೊದಲು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಬಫರ್ನೊಂದಿಗೆ ಸರಿಯಾಗಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ.
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು
ಸ್ಟಾಪ್ ಪರಿಹಾರವು 2M ಸಲ್ಫ್ಯೂರಿಕ್ ಆಮ್ಲವಾಗಿದೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಸ್ಪ್ಲಾಶಿಂಗ್ ಅನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ನಿರ್ವಹಿಸಿ!