DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) ಒಂದು endodeoxyribonuclease ಆಗಿದ್ದು ಅದು ಏಕ- ಅಥವಾ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA ಯನ್ನು ಜೀರ್ಣಿಸಿಕೊಳ್ಳಬಲ್ಲದು.ಇದು 5′-ಟರ್ಮಿನಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ ಮೊನೊಡೆಆಕ್ಸಿನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಸಿಂಗಲ್-ಅಥವಾ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಆಲಿಗೋಡಿಯೊಕ್ಸಿನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಫಾಸ್ಫೋಡೈಸ್ಟರ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸೀಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 3′-ಟರ್ಮಿನಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿಲ್.DNase I ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯು Ca2+ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು Mn2+ ಮತ್ತು Zn2+ ನಂತಹ ಡೈವೇಲೆಂಟ್ ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳಿಂದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು.5mM Ca2+ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಜಲವಿಚ್ಛೇದನದಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ.Mg2+ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, ಕಿಣ್ವವು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ ಡಿಎನ್ಎಯ ಯಾವುದೇ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ನಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ಗುರುತಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸೀಳಬಹುದು.Mn2+ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, ಡಿಎನ್ಎಯ ಎರಡು ಎಳೆಗಳನ್ನು ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ಗುರುತಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಬಹುತೇಕ ಒಂದೇ ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿ ಸೀಳಬಹುದು ಮತ್ತು 1-2 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು ಚಾಚಿಕೊಂಡಿರುವ ಫ್ಲಾಟ್ ಎಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳು ಅಥವಾ ಜಿಗುಟಾದ ಅಂತ್ಯದ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಬಹುದು.
ಉತ್ಪನ್ನ ಆಸ್ತಿ
ಗೋವಿನ ಪ್ಯಾಂಕ್ರಿಯಾಸ್ DNase I ಅನ್ನು ಯೀಸ್ಟ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು.
Cವಿರೋಧಿಗಳು
| ಘಟಕ | ಸಂಪುಟ | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-ಮುಕ್ತ | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ಮಿಲಿ |
| 10×DNase I ಬಫರ್ | 1mL | 1mL | 5× 1mL | 5 × 10 ಮಿಲಿ |
ಸಾರಿಗೆ ಮತ್ತು ಸಂಗ್ರಹಣೆ
1. ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿರತೆ: – ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ 15℃~-25℃;
2.ಸಾರಿಗೆ ಸ್ಥಿರತೆ: ಐಸ್ ಪ್ಯಾಕ್‌ಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಾರಿಗೆ;
3. ಇದರಲ್ಲಿ ಸರಬರಾಜು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% ಗ್ಲಿಸರಾಲ್, 25℃ ನಲ್ಲಿ pH 7.6.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
ಒಂದು ಘಟಕವನ್ನು ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು 10 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ 37 ° C ನಲ್ಲಿ 1 µg pBR322 DNA ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕೆಡಿಸುತ್ತದೆ.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
RNase:37 ℃ ನಲ್ಲಿ 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1.6 μg MS2 RNA ಜೊತೆ DNase I ನ 5U ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಂತೆ ಯಾವುದೇ ಅವನತಿಯನ್ನು ನೀಡುವುದಿಲ್ಲ.
ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಎಂಡೋಟಾಕ್ಸಿನ್:LAL-ಪರೀಕ್ಷೆ, ಚೈನೀಸ್ ಫಾರ್ಮಾಕೊಪೋಯಾ IV 2020 ಆವೃತ್ತಿಯ ಪ್ರಕಾರ, ಜೆಲ್ ಮಿತಿ ಪರೀಕ್ಷಾ ವಿಧಾನ, ಸಾಮಾನ್ಯ ನಿಯಮ (1143).ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಎಂಡೋಟಾಕ್ಸಿನ್ ಅಂಶವು ≤10 EU/mg ಆಗಿರಬೇಕು.
ಬಳಕೆಗೆ ಸೂಚನೆಗಳು
1.ಕೆಳಗೆ ಪಟ್ಟಿ ಮಾಡಲಾದ ಅನುಪಾತಗಳ ಪ್ರಕಾರ RNase-ಮುಕ್ತ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ:
| ಘಟಕ | ಸಂಪುಟ |
| ಆರ್ಎನ್ಎ | X μg |
| 10 × DNase I ಬಫರ್ | 1 μL |
| DNase I, RNase-ಮುಕ್ತ (5U/μL) | ಪ್ರತಿ μg ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗೆ 1 ಯು |
| ddH2O | 10 μL ವರೆಗೆ |
15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 2.37 ℃;
3.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಲು ಮುಕ್ತಾಯ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು DNase I ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 65℃ ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ. ಮಾದರಿಯನ್ನು ಮುಂದಿನ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕೆ ನೇರವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು.
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು
1.ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯ ಪ್ರತಿ μg ಗೆ 1U DNase I, ಅಥವಾ 1μg RNA ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ 1U DNase I ಅನ್ನು ಬಳಸಿ.
2.ಇಡಿಟಿಎಯನ್ನು 5 mM ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಸೇರಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವದ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ RNAಯನ್ನು ವಿಘಟಿಸದಂತೆ ರಕ್ಷಿಸಬೇಕು.
