ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎ (ಡಿಎಸ್ಆರ್ಎನ್ಎ) ಎಲಿಸಾ ಕಿಟ್

ಈ ಕಿಟ್ ಬಯೋಟಿನ್-ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟಾವಿಡಿನ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯೊಂದಿಗೆ ಎಂಜೈಮ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ ಇಮ್ಯುನೊಸಾರ್ಬೆಂಟ್ ಅಸ್ಸೇ (ELISA) ಸಂಯೋಜನೆಯಾಗಿದ್ದು, ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಿಸದೆಯೇ 60 ಮೂಲ ಜೋಡಿಗಳ (bp) ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಉದ್ದದೊಂದಿಗೆ dsRNA ಯ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಮಾಪನಕ್ಕಾಗಿ.ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಆಂಟಿಡಿಎಸ್ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತಿಕಾಯದಿಂದ ಮೊದಲೇ ಲೇಪಿಸಲಾಗಿದೆ.ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿರುವ dsRNA ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬಾವಿಗಳ ಮೇಲೆ ಲೇಪಿತವಾದ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ತದನಂತರ ಬಯೋಟಿನೈಲೇಟೆಡ್ ಆಂಟಿಡಿಎಸ್‌ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಡಿಎಸ್‌ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ, HRP-ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟಾವಿಡಿನ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬಯೋಟಿನೈಲೇಟೆಡ್ ಆಂಟಿಡಿಎಸ್ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತಿಕಾಯಕ್ಕೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ಕಾವು ನಂತರ ಅನ್ಬೌಂಡ್ HRP-ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟಾವಿಡಿನ್ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಂತರ TMB ತಲಾಧಾರದ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು HRP ಯಿಂದ ವೇಗವರ್ಧನೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆಮ್ಲೀಯ ಸ್ಟಾಪ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ ಹಳದಿ ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ಬದಲಾದ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ.ಹಳದಿಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಪ್ಲೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲಾದ ಡಿಎಸ್‌ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಗುರಿಯ ಪ್ರಮಾಣಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು 450 nm ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್

ಈ ಕಿಟ್ ಉಳಿದಿರುವ dsRNA ಯ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಮಾಪನಕ್ಕಾಗಿ.

ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು

ಶೇಖರಣೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆ

1. ಬಳಕೆಯಾಗದ ಕಿಟ್‌ಗಾಗಿ: ಸಂಪೂರ್ಣ ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವನದಲ್ಲಿ 2~8℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿರತೆಗಾಗಿ ಬಲವಾದ ಬೆಳಕನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.

2. ಬಳಸಿದ ಕಿಟ್‌ಗಾಗಿ: ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್ ತೆರೆದ ನಂತರ, ದಯವಿಟ್ಟು ಬಳಕೆಯಾಗದ ಬಾವಿಗಳನ್ನು ಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಮುಚ್ಚಿ ಮತ್ತು ಡೆಸಿಕ್ಯಾಂಟ್ ಪ್ಯಾಕ್ ಹೊಂದಿರುವ ಫಾಯಿಲ್ ಪೌಚ್‌ಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿ, ಫಾಯಿಲ್ ಪೌಚ್ ಅನ್ನು ಜಿಪ್-ಸೀಲ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಬಳಕೆಯ ನಂತರ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಬೇಗ 2~8℃ ಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿ.ಇತರ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದ ನಂತರ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಬೇಗ 2~8℃ ಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿಸಬೇಕು.

ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಸಾಮಗ್ರಿಗಳು ಆದರೆ ಸರಬರಾಜು ಮಾಡಲಾಗಿಲ್ಲ

1. 450±10nm ಫಿಲ್ಟರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ (450 ಮತ್ತು 650 nm ತರಂಗಾಂತರದಲ್ಲಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದರೆ ಉತ್ತಮ).

2. ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್ ಶೇಕರ್.

3. RNase-ಮುಕ್ತ ಸಲಹೆಗಳು ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್ಗಳು.

ಆಪರೇಷನ್ ಫ್ಲೋಚಾರ್ಟ್

ನೀನು ಆರಂಭಿಸುವ ಮೊದಲು

1. ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಎಲ್ಲಾ ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶಕ್ಕೆ (18-25℃) ತನ್ನಿ.ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಒಂದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗದಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಪ್ರಸ್ತುತ ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕಾಗಿ ಸ್ಟ್ರಿಪ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಉಳಿದ ಸ್ಟ್ರಿಪ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಬಿಡಿ.

2. ವಾಶ್ ಬಫರ್: 800mL 1× ವಾಶ್ ಬಫರ್ ತಯಾರಿಸಲು 760mL ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ಅಥವಾ ಡಿಸ್ಟಿಲ್ಡ್ ವಾಟರ್‌ನೊಂದಿಗೆ 40mL 20× ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ವಾಶ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ.

3. ಪ್ರಮಾಣಿತ: ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಸ್ಟಾಕ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ತಿರುಗಿಸಿ ಅಥವಾ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ.ಒದಗಿಸಿದ ನಾಲ್ಕು ಮಾನದಂಡಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 5ng/μL ಆಗಿದೆ.UTP ಮತ್ತು pUTP dsRNA ಮಾನದಂಡಗಳಿಗಾಗಿ, ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ ಅನ್ನು ಸೆಳೆಯಲು ದಯವಿಟ್ಟು ಸ್ಟಾಕ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು 1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312,0.0156,0pg/μL ಗೆ STE ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ.N1-Me-pUTP dsRNA ಮಾನದಂಡಗಳಿಗಾಗಿ, ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ ಅನ್ನು ಸೆಳೆಯಲು ದಯವಿಟ್ಟು ಸ್ಟಾಕ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು 2,1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312, 0pg/μL ಗೆ STE ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ.5-OMe-UTP dsRNA ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್‌ಗಾಗಿ, ದಯವಿಟ್ಟು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ ಅನ್ನು ಸೆಳೆಯಲು STE ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ 4,2,1,0.5, 0.25,0.125,0.0625, 0pg/μL ಗೆ ಸ್ಟಾಕ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ.ಮಾನದಂಡಗಳನ್ನು ಕೆಳಗಿನ ಚಾರ್ಟ್‌ಗಳಂತೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬಹುದು ಎಂದು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ:

4. ಬಯೋಟಿನೈಲೇಟೆಡ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಆಂಟಿಬಾಡಿ ಮತ್ತು HRP-ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟಾವಿಡಿನ್ ಕೆಲಸದ ಪರಿಹಾರ: ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಸ್ಟಾಕ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ತಿರುಗಿಸಿ ಅಥವಾ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ.ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಬಫರ್ನೊಂದಿಗೆ ಕೆಲಸ ಮಾಡುವ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಅವುಗಳನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ.

5. TMB ಸಬ್‌ಸ್ಟೇಟ್: ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಸಲಹೆಗಳೊಂದಿಗೆ ದ್ರಾವಣದ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಡೋಸೇಜ್ ಅನ್ನು ಆಸ್ಪಿರೇಟ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಉಳಿದ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಮತ್ತೆ ಸೀಸೆಗೆ ಎಸೆಯಬೇಡಿ.TMB ಸಬ್‌ಸ್ಟೇಟ್ ಬೆಳಕಿಗೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿರುತ್ತದೆ, TMB ಸಬ್‌ಸ್ಟ್ರೇಟ್ ಅನ್ನು ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಬೆಳಕಿಗೆ ಒಡ್ಡಬೇಡಿ.

ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಬಳಸುವುದು

1. ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಪಟ್ಟಿಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿ.ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಚೌಕಟ್ಟುಗಳಲ್ಲಿ ಪಟ್ಟಿಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸದ ಉಳಿದ ಪ್ಲೇಟ್ ಪಟ್ಟಿಗಳನ್ನು ಡೆಸಿಕ್ಯಾಂಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಬ್ಯಾಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಮತ್ತೆ ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಬೇಕು.ರೆಫ್ರಿಜರೇಟೆಡ್ ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ ಚೀಲವನ್ನು ಬಿಗಿಯಾಗಿ ಮುಚ್ಚಿ.

2. ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್, ಖಾಲಿ ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳ ಪ್ರತಿ 100μL ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗಳನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾದ ಬಾವಿಗಳಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಿ.ಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲರ್ನೊಂದಿಗೆ ಕವರ್ ಮಾಡಿ.500rpm ನಲ್ಲಿ ಅಲುಗಾಡಿಸುವುದರೊಂದಿಗೆ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.ನಿಖರವಾದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸರಿಯಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ STE ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬೇಕು.

3. ತೊಳೆಯುವ ಹಂತ: ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಆಸ್ಪಿರೇಟ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 250μL ವಾಶ್ ಬಫರ್‌ನಿಂದ ತೊಳೆಯಿರಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು 30 ಸೆ.ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಕಾಗದದ ಮೇಲೆ ಸ್ನ್ಯಾಪ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ತೊಳೆಯುವ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತ್ಯಜಿಸಿ.ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ 4 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಿರಿ.

4. ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 100μL ಬಯೋಟಿನೈಲೇಟೆಡ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಆಂಟಿಬಾಡಿ ವರ್ಕಿಂಗ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲರ್ನೊಂದಿಗೆ ಕವರ್ ಮಾಡಿ.500rpm ನಲ್ಲಿ ಅಲುಗಾಡಿಸುವುದರೊಂದಿಗೆ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.

5. ವಾಶ್ ಹಂತವನ್ನು ಪುನರಾವರ್ತಿಸಿ.

6. ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 100μL HRP-ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟಾವಿಡಿನ್ ಕೆಲಸದ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲರ್ನೊಂದಿಗೆ ಕವರ್ ಮಾಡಿ.500rpm ನಲ್ಲಿ ಅಲುಗಾಡಿಸುವುದರೊಂದಿಗೆ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.

7. ಮತ್ತೆ ವಾಶ್ ಹಂತವನ್ನು ಪುನರಾವರ್ತಿಸಿ.

8. ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 100μL TMB ತಲಾಧಾರದ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲರ್ನೊಂದಿಗೆ ಕವರ್ ಮಾಡಿ.RT ರಕ್ಷಣೆಯಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.ತಲಾಧಾರದ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ದ್ರವವು ನೀಲಿ ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ತಿರುಗುತ್ತದೆ.

9. ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 50μL ಸ್ಟಾಪ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಸ್ಟಾಪ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ದ್ರವವು ಹಳದಿ ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ತಿರುಗುತ್ತದೆ.ನಂತರ ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ ಅನ್ನು ರನ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ತಕ್ಷಣವೇ 450nm ನಲ್ಲಿ ಮಾಪನವನ್ನು ನಡೆಸಿ.

ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ

1. ಪ್ರತಿ ಪ್ರಮಾಣಿತ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ನಕಲು ವಾಚನಗೋಷ್ಠಿಯನ್ನು ಸರಾಸರಿ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಸರಾಸರಿ ಶೂನ್ಯ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಳೆಯಿರಿ.ಲಂಬ (Y) ಅಕ್ಷದ ಮೇಲೆ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಿ ಮತ್ತು ಸಮತಲ (X)ಅಕ್ಷದ ಮೇಲೆ dsRNA ಸಾಂದ್ರತೆ.

2. 5 ಅಥವಾ 4 ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್ ನಾನ್-ಲೀನಿಯರ್ ಫಿಟ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಕರ್ವ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪರ್ಟ್ 1.3 ಅಥವಾ ELISA ಕ್ಯಾಲ್ಕ್‌ನಂತಹ ಕಂಪ್ಯೂಟರ್ ಆಧಾರಿತ ಕರ್ವ್-ಫಿಟ್ಟಿಂಗ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

ಪ್ರದರ್ಶನ

1. ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ:

ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ಕಡಿಮೆ ಮಿತಿ: ≤ 0.001pg/μL (UTP-, pUTP-, N1-Me-pUTP-dsRNA ಗಾಗಿ), ≤ 0.01pg/μL (5-OMe-UTP-dsRNA ಗಾಗಿ).

ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದ ಪ್ರಮಾಣ:0.0156 pg/μL (UTP-, pUTP-dsRNA ಗಾಗಿ),0.0312 pg/μL (N1-Me-pUTP-dsRNA ಗಾಗಿ),0.0625 pg/μL (5-OMe-UTP-dsRNA ಗಾಗಿ).

2. ನಿಖರತೆ: ಸಿವಿ ಇಂಟ್ರಾ-ಅಸ್ಸೇ ≤10%, ಸಿವಿ ಇಂಟರ್-ಅಸ್ಸೇ ≤10%

3. ಚೇತರಿಕೆ:80%~120%

4.ಲೀನಿಯರಿಟಿ:0.0156-0.5pg/μL(FORUTP-,pUTP-dsRNA)0.0312-1pg/μL(ForN1-Me-pUTP dsRNA),0.0625-1pg/μL(5-OMe-UTP-dsRNA ಗಾಗಿ).

ಪರಿಗಣನೆಗಳು

1. TMB ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಸಮಯವು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಸೂಚನೆಯ ಪ್ರಕಾರ ಅವುಗಳನ್ನು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸಿ.

2. ಉತ್ತಮ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸುವ ಸಲುವಾಗಿ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಅನ್-ರಿಯಾಕ್ಟ್ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಸರಿಯಾದ ತೊಳೆಯುವುದು ಅತ್ಯಗತ್ಯ.

3. ಎಲ್ಲಾ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕು ಮತ್ತು ಮಾದರಿ ಅಥವಾ ಕಾರಕಗಳ ಸೇರ್ಪಡೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬಂಬಲ್‌ಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.

4. ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ವಾಶ್ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ (20x) ಹರಳುಗಳು ರೂಪುಗೊಂಡಿದ್ದರೆ, 37℃ ಗೆ ಬೆಚ್ಚಗಾಗಿಸಿ ಮತ್ತು ಹರಳುಗಳು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗುವ ತನಕ ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.

5. ಸೋಡಿಯಂ ಅಜೈಡ್ (NaN3) ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ, ಏಕೆಂದರೆ ಇದು HRP ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಾಶಪಡಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ dsRNA ಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಅಂದಾಜು ಮಾಡಬಹುದು.

6. ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ RNase ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.

7. ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್/ಮಾದರಿ, ಪತ್ತೆ ಪ್ರತಿಕಾಯ ಮತ್ತು SA-HRP ಅನ್ನು ಸಹ ಅಲುಗಾಡದೆ RT ನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಬಹುದು, ಆದರೆ ಇದು ಪತ್ತೆ ಸಂವೇದನೆ ಒಂದು ಪಟ್ಟು ಕಡಿಮೆಯಾಗಲು ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, UTP ಮತ್ತು pUTP dsRNA ಮಾನದಂಡಗಳನ್ನು 2pg/μL ನಿಂದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬೇಕೆಂದು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ, N1-Me-pUTP dsRNA ಮಾನದಂಡಗಳನ್ನು 4pg/μL ನಿಂದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು 5-OMe-UTP dsRNA ಮಾನದಂಡವನ್ನು 8pg/μL ನಿಂದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬೇಕು.ಜೊತೆಗೆ, ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 60 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ HRP-ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟಾವಿಡಿನ್ ಕೆಲಸದ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಕಾವುಕೊಡಿ.ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ ಶೇಕರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬೇಡಿ, ಏಕೆಂದರೆ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ ಶೇಕರ್ ತಪ್ಪಾದ ಫಲಿತಾಂಶಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.

ವಿಶಿಷ್ಟ ಫಲಿತಾಂಶ

1. ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಕರ್ವ್ ಡೇಟಾ

2. ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಕರ್ವ್ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ

3. ಲೈನರ್ ಪತ್ತೆ ಶ್ರೇಣಿ: 0.0312- 1pg/μL