ರೋಬಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್
ರೋಬಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಒಂದು ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಆಗಿದೆ.ಪಿಸಿಆರ್ ಸಿಸ್ಟಂ ತಯಾರಿಕೆ ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಅನೆಲಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಪ್ರೈಮರ್ ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸುವಿಕೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ತಡೆಯುವುದಿಲ್ಲ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಇದು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ವರ್ಧನೆಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ಡ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಇದು ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.ಇದಲ್ಲದೆ, ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಉತ್ತಮ ಅನ್ವಯಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರವಾದ ವರ್ಧನೆಯ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು.
ಘಟಕಗಳು
1.5 U/μL ರೋಬಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್
2.10 × PCR ಬಫರ್ II (Mg²+ ಉಚಿತ) (ಐಚ್ಛಿಕ)
3.25 mM MgCl2(ಐಚ್ಛಿಕ)
* 10 × PCR ಬಫರ್ II (Mg²+ ಉಚಿತ) dNTP ಮತ್ತು Mg²+ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿಲ್ಲ, ದಯವಿಟ್ಟು dNTPs ಮತ್ತು MgCl ಸೇರಿಸಿ2ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವಾಗ.
ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾದ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳು
1.ವೇಗದ ವರ್ಧನೆ.
2.ಬಹು ವರ್ಧನೆ.
3.ರಕ್ತ, ಸ್ವ್ಯಾಬ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಮಾದರಿಗಳ ನೇರ ವರ್ಧನೆ.
4.ಉಸಿರಾಟದ ಕಾಯಿಲೆಗಳ ಪತ್ತೆ.
ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿತಿ
ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ -20 ° C, ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕು, ಆಗಾಗ್ಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
* ಶೈತ್ಯೀಕರಣದ ನಂತರ ಮಳೆಯು ಸಂಭವಿಸಿದರೆ, ಅದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ;ಮಿಶ್ರಣ ಮತ್ತು ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶಕ್ಕೆ ಸಮತೂಕಗೊಳಿಸಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
ಒಂದು ಸಕ್ರಿಯ ಘಟಕ (U) ಅನ್ನು 10 nmol ಡಿಯೋಕ್ಸಿರಿಬೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಅನ್ನು ಆಮ್ಲ-ಕರಗದ ವಸ್ತುವಾಗಿ 74 ° C ನಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಸಕ್ರಿಯ ಸಾಲ್ಮನ್ ವೀರ್ಯ DNA ಯನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್/ಪ್ರೈಮರ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
1.SDS-PAGE ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಟಿಕ್ ಶುದ್ಧತೆ 98% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು.
2.ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಸೆನ್ಸಿಟಿವಿಟಿ, ಬ್ಯಾಚ್-ಟು-ಬ್ಯಾಚ್ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಸ್ಥಿರತೆ.
3.ಯಾವುದೇ ಬಾಹ್ಯ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯಿಲ್ಲ, ಬಾಹ್ಯ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಅಥವಾ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಮಾಲಿನ್ಯವಿಲ್ಲ
ಸೂಚನೆಗಳು
ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಸೆಟಪ್
| ಘಟಕಗಳು | ಸಂಪುಟ (μL) | ಅಂತಿಮ ಏಕಾಗ್ರತೆ |
| 10 × PCR ಬಫರ್ II (Mg²+ ಉಚಿತ)a | 5 | 1× |
| dNTP ಗಳು (10mM ಪ್ರತಿ dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 ಮಿ.ಮೀ |
| ರೋಬಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟಾಕ್ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 ಯು |
| 25 × ಪ್ರೈಮರ್ ಮಿಶ್ರಣಬಿ | 2 | 1× |
| ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ | - | 1 μg/ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ |
| ddH2O | 50 ಕ್ಕೆ | - |
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:
1) ಎ.ಬಫರ್ dNTP ಮತ್ತು Mg²+ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿಲ್ಲ, ದಯವಿಟ್ಟು dNTPs ಮತ್ತು MgCl ಸೇರಿಸಿ2ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವಾಗ.
2) ಬಿ.qPCR/qRT-PCR ಗೆ ಬಳಸಿದರೆ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಶೋಧಕಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಸೇರಿಸಬೇಕು.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, 0.2 μM ನ ಅಂತಿಮ ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ;ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯು ಕಳಪೆಯಾಗಿದ್ದರೆ, ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 0.2-1 μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಸರಿಹೊಂದಿಸಬಹುದು.ತನಿಖೆಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 0.1-0.3 μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಬ್‌ನ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಏಕಾಗ್ರತೆಯ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಮಾಡಬಹುದು.
ಥರ್ಮಲ್ ಸೈಕ್ಲಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್
| ನಿಯಮಿತ ಪಿಸಿಆರ್ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ | |||
| ಹಂತ | ತಾಪಮಾನ | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್‌ಗಳು |
| ಪ್ರೀ-ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95℃ | 1-5 ನಿಮಿಷಗಳು | 1 |
| ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95℃ | 10-20 ಸೆ | 40-50 |
| ಅನೆಲಿಂಗ್ / ವಿಸ್ತರಣೆ | 56-64℃ | 20-60 ಸೆ | |
| ವೇಗದ ಪಿಸಿಆರ್ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ | |||
| ಹಂತ | ತಾಪಮಾನ | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್‌ಗಳು |
| ಪ್ರೀ-ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95℃ | 30 ಸೆ | 1 |
| ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95℃ | 1-5 ಸೆ | 40-45 |
| ಅನೆಲಿಂಗ್ / ವಿಸ್ತರಣೆ | 56-64℃ | 5-20 ಸೆ | |
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು
1.ವೇಗದ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ವರ್ಧನೆಯ ದರವು 1 kb/10 s ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿರಬಾರದು.ವಿವಿಧ ಪಿಸಿಆರ್ ಉಪಕರಣಗಳ ತಾಪಮಾನ ಏರಿಕೆ ಮತ್ತು ಕುಸಿತದ ಪ್ರಮಾಣ, ತಾಪಮಾನ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮೋಡ್ ಮತ್ತು ಶಾಖದ ವಹನ ದಕ್ಷತೆಯು ಬಹಳ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವೇಗದ ಪಿಸಿಆರ್ ಉಪಕರಣಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
2.ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಹೆಚ್ಚು ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳಬಲ್ಲದು, ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯೊಂದಿಗೆ.
3.ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯ PCR ಪತ್ತೆ ಕಾರಕಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲು ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ PCR ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಬಹುದು.
4.5′→3′ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ, 5′→3′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ;ಯಾವುದೇ 3′→5′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ;ಪ್ರೂಫ್ ರೀಡಿಂಗ್ ಕಾರ್ಯವಿಲ್ಲ.
5.PCR ಮತ್ತು RT-PCR ನ ಗುಣಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.
6.PCR ಉತ್ಪನ್ನದ 3′ ಅಂತ್ಯವು A ಆಗಿದೆ, ಇದನ್ನು ನೇರವಾಗಿ T ವೆಕ್ಟರ್‌ಗೆ ಕ್ಲೋನ್ ಮಾಡಬಹುದು.
7.ಮೂರು-ಹಂತದ ವಿಧಾನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಗೆ ಅಥವಾ 200 bp ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ತುಣುಕುಗಳ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
