ತಾಪಮಾನ ಸಂವೇದನಾಶೀಲ ಯುಎನ್‌ಜಿ
ಟೆಂಪರೇಚರ್ ಸೆನ್ಸಿಟಿವ್ ಯುಎನ್‌ಜಿ (ಟಿಎಸ್-ಯುಎನ್‌ಜಿ) ಎಂಬುದು ಇ.ಕೋಲಿಯಲ್ಲಿ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.ಕಿಣ್ವವು ಯುರಾಸಿಲ್-ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಏಕ- ಮತ್ತು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯಿಂದ ಉಚಿತ ಯುರಾಸಿಲ್ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ವೇಗವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ವಿರುದ್ಧ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯವಾಗಿದೆ.E. ಕೊಲಿ ಜೀನ್ ಮೂಲದ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ UNG ಕಿಣ್ವದೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, TS-UNG ಕಿಣ್ವವು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (20℃~37℃) ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಮತ್ತು ಸುಲಭವಾಗಿ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ (50℃), dUTP-ಹೊಂದಿರುವ ವರ್ಧನೆಯ ಅವನತಿಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುತ್ತದೆ. ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ UNG ಕಿಣ್ವವನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ ಉಳಿಯಬಹುದಾದ ಉಳಿದ ಚಟುವಟಿಕೆಯಿಂದ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು.ಆದ್ದರಿಂದ, TS-UNG ಕಿಣ್ವವು PCR ಮಾಲಿನ್ಯ ತಡೆಗಟ್ಟುವಿಕೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಮಾತ್ರ ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ, ಆದರೆ RT-PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಷನ್ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂನೊಂದಿಗೆ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು RT-PCR ಮಾಲಿನ್ಯ ತಡೆಗಟ್ಟುವಿಕೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಬಹುದು.
ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಿದ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್
ಮಾಲಿನ್ಯ ತಡೆಗಟ್ಟುವಿಕೆ ವರ್ಧನೆ
ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿತಿ
ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ -20 ° C, ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕು, ಆಗಾಗ್ಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಶೇಖರಣಾ ಬಫರ್
20 mM Tris-HCl (pH 7.5) , 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, ಸ್ಟೇಬಿಲೈಸರ್, 50% ಗ್ಲಿಸರಾಲ್.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
37°C ನಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆಯಲ್ಲಿ dU ಬೇಸ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 1µg ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ವಿಘಟಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣವು 1 ಘಟಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯಾಗಿದೆ (U).
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
1.SDS-PAGE ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಟಿಕ್ ಶುದ್ಧತೆ 98% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು
2.ಅವನತಿ ಚಟುವಟಿಕೆ, ಬ್ಯಾಚ್-ಟು-ಬ್ಯಾಚ್ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಸ್ಥಿರತೆ
3.ಯಾವುದೇ ಬಾಹ್ಯ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯಿಲ್ಲ, ಯಾವುದೇ ಬಾಹ್ಯ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಅಥವಾ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಮಾಲಿನ್ಯವಿಲ್ಲ.
ಸೂಚನೆಗಳು
| ಘಟಕಗಳು | ಪರಿಮಾಣ (μL) | ಅಂತಿಮ ಏಕಾಗ್ರತೆ |
| 10 × PCR ಬಫರ್ (dNTP ಉಚಿತ, Mg²+ಉಚಿತ) | 5 | 1× |
| dUTP ಗಳು (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP ಬದಲಿಗೆ) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 ಮಿ.ಮೀ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 ಯು |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × ಪ್ರೈಮರ್ ಮಿಕ್ಸ್ಎ | 2 | 1× |
| ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ | - | 1μg/ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ |
| ddH₂O | 50 ಕ್ಕೆ | - |
ಗಮನಿಸಿ: a: qPCR/qRT-PCR ಗಾಗಿ ಬಳಸಿದರೆ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತನಿಖೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಬೇಕು.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, 0.2 μM ನ ಅಂತಿಮ ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ;ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯು ಕಳಪೆಯಾಗಿರುವಾಗ, ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 0.2-1 μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಸರಿಹೊಂದಿಸಬಹುದು.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ತನಿಖೆಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 0.1-0.3 μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಬ್‌ನ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಏಕಾಗ್ರತೆಯ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಮಾಡಬಹುದು.
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು
1.TS-UNG ಕಿಣ್ವದ ಸೂಕ್ತ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಉಷ್ಣತೆಯು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಇದನ್ನು 20℃~37℃ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಬಹುದು, ಕಿಣ್ವದ ಡೋಸೇಜ್ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಸಮಯವನ್ನು 0.1~0.5 U, 5~ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಬಹುದು. 10 ನಿಮಿಷ;ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು.
2.ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಇದು PCR ಮತ್ತು RT-PCR ಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.
3.ಆಗಾಗ್ಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ ಮತ್ತು ದೊಡ್ಡ ತಾಪಮಾನ ಏರಿಳಿತಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳಬೇಡಿ.
4.ವರ್ಧಿಸಬೇಕಾದ ವಿಭಿನ್ನ ಜೀನ್‌ಗಳು dUTP ಯ ವಿಭಿನ್ನ ಬಳಕೆಯ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು UNG ಕಿಣ್ವಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ, UNG ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಬಳಕೆಯು ಪತ್ತೆ ಸಂವೇದನೆಯಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾದರೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಬೇಕು, ನಿಮಗೆ ತಾಂತ್ರಿಕ ಬೆಂಬಲ ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ ನಮ್ಮ ಕಂಪನಿ.
