DNase I (Rnase ಉಚಿತ)(5u/ul)
ಬೆಕ್ಕು ಸಂಖ್ಯೆ: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) ಒಂದು endodeoxyribonuclease ಆಗಿದ್ದು ಅದು ಏಕ- ಅಥವಾ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA ಯನ್ನು ಜೀರ್ಣಿಸಿಕೊಳ್ಳಬಲ್ಲದು.ಇದು 5'-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಮತ್ತು 3'-ಟರ್ಮಿನಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ ಮೊನೊಡೆಆಕ್ಸಿನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಸಿಂಗಲ್-ಅಥವಾ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಆಲಿಗೋಡೆಆಕ್ಸಿನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಫಾಸ್ಫೋಡೈಸ್ಟರ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸೀಳುತ್ತದೆ.DNase I ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯು Ca ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ2+ಮತ್ತು Mn ನಂತಹ ಡೈವೇಲೆಂಟ್ ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳಿಂದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು2+ಮತ್ತು Zn2+.5 mM Ca2+ಜಲವಿಚ್ಛೇದನದಿಂದ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ.ಎಂಜಿ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ2+, ಕಿಣ್ವವು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ ಡಿಎನ್ಎಯ ಯಾವುದೇ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ನಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ಗುರುತಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸೀಳಬಹುದು.Mn ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ2+, ಡಿಎನ್ಎಯ ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗಳನ್ನು ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ಗುರುತಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಬಹುತೇಕ ಒಂದೇ ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿ ಸೀಳಬಹುದು ಮತ್ತು 1-2 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು ಚಾಚಿಕೊಂಡಿರುವ ಫ್ಲಾಟ್ ಎಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳು ಅಥವಾ ಜಿಗುಟಾದ ಅಂತ್ಯದ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಬಹುದು.
ಘಟಕಗಳು
| ಹೆಸರು | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-ಮುಕ್ತ | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ಮಿ.ಲೀ |
| 10×DNase I ಬಫರ್ | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 ಮಿಲಿ |
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ -25℃~-15℃;ಐಸ್ ಪ್ಯಾಕ್ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಾರಿಗೆ.
ಸೂಚನೆಗಳು
1. ಕೆಳಗೆ ಪಟ್ಟಿ ಮಾಡಲಾದ ಅನುಪಾತಗಳ ಪ್ರಕಾರ RNase-ಮುಕ್ತ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ:
| ಘಟಕ | ಸಂಪುಟ |
| ಆರ್ಎನ್ಎ | X µg |
| 10 × DNase I ಬಫರ್ | 1μL |
| DNase I, RNase-ಮುಕ್ತ (5U/μL) | 1 U ಪ್ರತಿ µg RNA① |
| ddH2O | 10μL ವರೆಗೆ |
ಗಮನಿಸಿ: ① RNA ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಆಧರಿಸಿ ಸೇರಿಸಬೇಕಾದ DNase I ನ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡಿ.
2. 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37 ℃;
3. 2.5mM~5mM ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ 0.5M EDTA ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಲು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 65℃ ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ.ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್‌ನಂತಹ ಮುಂದಿನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಾಗಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದುಪ್ರಯೋಗ.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
ಒಂದು ಘಟಕವು 1µg pBR322 ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕೆಡಿಸುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.37℃ ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ DNA.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
RNase:37℃ ನಲ್ಲಿ 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1.6µg MS2 RNA ಜೊತೆ DNase I ನ 5U ಯಾವುದೇ ಅವನತಿಯನ್ನು ನೀಡುವುದಿಲ್ಲಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು
1. ದಯವಿಟ್ಟು 0.5MEDTA ಅನ್ನು ನೀವೇ ತಯಾರಿಸಿ.
2. ಪ್ರತಿ µg RNAಗೆ 1U DNase I ಅನ್ನು ಬಳಸಿ.ಆದಾಗ್ಯೂ, RNA 1µg ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು 1U DNase I ಅನ್ನು ಬಳಸಿ.
3. ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಐಸ್ ಮೇಲೆ ಇರಿಸಿ.
