ಸೂಪರ್‌ಸ್ಟಾರ್ಟ್ qPCR ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್ ಜೊತೆಗೆ-UNG
ಬೆಕ್ಕು ಸಂಖ್ಯೆ: HCB5071E
ಸೂಪರ್‌ಸ್ಟಾರ್ಟ್ qPCR ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್ ಪ್ಲಸ್-ಯುಎನ್‌ಜಿ ಎನ್ನುವುದು ವಿಶೇಷವಾದ ಕಾರಕವಾಗಿದ್ದು, ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಗುಣಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ ಪ್ರೋಬ್-ಆಧಾರಿತ ಪತ್ತೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದನ್ನು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಲೈಫೈಲೈಸೇಶನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಇದು ಹೊಸ ಹಾಟ್-ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಕಿಣ್ವ ಹಾಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟಾಕ್ ಪ್ಲಸ್ (ಡಿಜಿ) ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, ಇದು ಟಾಕ್ ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಮುಚ್ಚಿರುತ್ತದೆ, ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರೈಮರ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಅನೆಲಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಪ್ರೈಮರ್ ಡೈಮರ್ ರಚನೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತಡೆಯುತ್ತದೆ, ಹೀಗಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ. ವರ್ಧನೆ ಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ.ಈ ಕಾರಕವು ಕ್ಷಿಪ್ರ ಬಿಸಿ-ಪ್ರಾರಂಭವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ qPCR ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಬಫರ್ ಮತ್ತು UNG/dUTP ವಿರೋಧಿ ಮಾಲಿನ್ಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ.ಇದು ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ಪರಿಮಾಣ ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮ ಗುಣಮಟ್ಟದ ವಕ್ರಾಕೃತಿಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ಉಳಿದ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಅಥವಾ ಏರೋಸಾಲ್ ಮಾಲಿನ್ಯದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತಡೆಯುತ್ತದೆ.ಈ ಕಾರಕವು ಅಪ್ಲೈಡ್ ಬಯೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್, ಎಪ್ಪೆಂಡಾರ್ಫ್, ಬಯೋ-ರಾಡ್ ಮತ್ತು ರೋಚೆ ಮುಂತಾದ ತಯಾರಕರಿಂದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಉಪಕರಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಲೈಯೋಫೈಲೈಸ್ಡ್ ರೂಪದಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ.
ಕಾರಕ ಸಂಯೋಜನೆ
1. 5×HotstartPremix ಜೊತೆಗೆ-UNG (Mg2+ಉಚಿತ) (ಡಿಜಿ)
2. 250 mM MgCl2
3. 4× ಲೈಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್ (ಐಚ್ಛಿಕ)
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
-20℃ ನಲ್ಲಿ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಸಂಗ್ರಹಣೆ;4℃ ನಲ್ಲಿ 3 ತಿಂಗಳವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ ಮತ್ತುಪುನರಾವರ್ತಿತ ಘನೀಕರಣ ಮತ್ತು ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಸೈಕ್ಲಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್
| ವಿಧಾನ | ತಾಪ | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್ |
| ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆ | 50℃ | 2 ನಿಮಿಷ | 1 |
| ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ | 95℃ | 1~5 ನಿಮಿಷ | 1 |
| ಡೆನೇಚರ್ | 95℃ | 10~20 ಸೆ | 40-50 |
| ಅನೆಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಣೆ | 56~64℃ | 20~60 ಸೆ | 40-50 |
qPCR ಲಿಕ್ವಿಡ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ Syಕಾಂಡದ ತಯಾರಿ
|
ಸಂಯೋಜನೆ |
25µL ಪರಿಮಾಣ |
50µL ಪರಿಮಾಣ |
ಅಂತಿಮ ಏಕಾಗ್ರತೆ |
| 5×HotstartPremix ಜೊತೆಗೆ-UNG(ಎಂಜಿ2+ಉಚಿತ) (ಡಿಜಿ) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 ಮಿ.ಮೀ |
| 4× ಲೈಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×ಪ್ರೈಮರ್-ಪ್ರೋಬ್ ಮಿಕ್ಸ್2 | 1µL | 2µL | 1× |
| ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್ಎ3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL ಗೆ | 50µL ಗೆ | —— |
1. ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಗೆ 0.2μMನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ;ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯು ಕಳಪೆಯಾಗಿರುವಾಗ, ಅಗತ್ಯವಿರುವಂತೆ 0.2-1μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿಸಿ.ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಂಯೋಜನೆಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಬ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 0.1-0.3μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.
2. ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗಳ ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ;ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ಸೂಕ್ತವಾದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸೇರ್ಪಡೆ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು.
3. ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ ಮಾಡಬಹುದು;ಗ್ರಾಹಕರು ಘನೀಕರಿಸುವ-ಒಣಗಿಸುವ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳಿಲ್ಲದೆ ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿದಾಗ, 4× ಲೈಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಆಯ್ದವಾಗಿ ಸೇರಿಸಬಹುದು; ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಅಗತ್ಯವಿದ್ದಲ್ಲಿ, ದ್ರವ ಕಾರಕಗಳ ಹಂತದ ಉತ್ಪನ್ನ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ಮೌಲ್ಯೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಲೈಯೋಫೈಲೈಸ್ಡ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಘಟಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು 4× ಲೈಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಬೇಕು. ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಗಳು.
ಸಿಸ್ಟಮ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವಾಗd ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿಸಲು, ತಯಾರು ವ್ಯವಸ್ಥೆ as ಕೆಳಗಿನ:
| ಸಂಯೋಜನೆ | 25µL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ |
| 5 × ಹಾಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ಟ್‌ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್ ಪ್ಲಸ್-ಯುಎನ್‌ಜಿ (ಎಂಜಿ2+ಉಚಿತ) (ಡಿಜಿ) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4× ಲೈಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್ | 6.25µL |
| 25×ಪ್ರೈಮರ್-ಪ್ರೋಬ್ ಮಿಕ್ಸ್ | 1µL |
| ddH2O | 18~20µL ಗೆ |
* ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿಸಲು ಇತರ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ.
ಲಿಯೋಫಿಲೈಸೇಶನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆss
| ವಿಧಾನ | ತಾಪ | ಸಮಯ | ಸ್ಥಿತಿ | ಒತ್ತಡ |
| ಪೂರ್ವ-ಘನೀಕರಿಸುವಿಕೆ | 4℃ | 30 ನಿಮಿಷ | ಹಿಡಿದುಕೊಳ್ಳಿ |
1 ಎಟಿಎಂ |
| -50℃ | 60 ನಿಮಿಷ | ಕೂಲಿಂಗ್ | ||
| -50℃ | 180 ನಿಮಿಷ | ಹಿಡಿದುಕೊಳ್ಳಿ | ||
| ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಒಣಗಿಸುವಿಕೆ | -30℃ | 60 ನಿಮಿಷ | ಬಿಸಿ |
ಅಂತಿಮ ನಿರ್ವಾತ |
| -30℃ | 70 ನಿಮಿಷ | ಹಿಡಿದುಕೊಳ್ಳಿ | ||
| ದ್ವಿತೀಯ ಒಣಗಿಸುವಿಕೆ | 25℃ | 60 ನಿಮಿಷ | ಬಿಸಿ |
ಅಂತಿಮ ನಿರ್ವಾತ |
| 25℃ | 300 ನಿಮಿಷ | ಹಿಡಿದುಕೊಳ್ಳಿ |
2. ಮೇಲಿನ ಲೈಫೈಲೈಸೇಶನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಉಲ್ಲೇಖಕ್ಕಾಗಿ ಮಾತ್ರ.ವಿಭಿನ್ನ ಉತ್ಪನ್ನ ಪ್ರಕಾರಗಳು ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈಯರ್‌ಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ನಿಜವಾದ ಪ್ರಕಾರ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಗಳನ್ನು ಮಾಡಬಹುದುಬಳಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು.
3. ವಿವಿಧ ಲೈಯೋಫೈಲೈಸೇಶನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳು ವಿವಿಧ ಬ್ಯಾಚ್ ಗಾತ್ರದ ಲೈಯೋಫೈಲೈಸೇಶನ್‌ಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಬಹುದುಉತ್ಪನ್ನಗಳು, ಆದ್ದರಿಂದ ದೊಡ್ಡ-ಪ್ರಮಾಣದ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಬಳಸಿದಾಗ ಸಾಕಷ್ಟು ಪರೀಕ್ಷಾ ಮೌಲ್ಯೀಕರಣವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಬೇಕು.
ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ ಬಳಕೆಗೆ ಸೂಚನೆಗಳುd ಪುಡಿ
1. ಲೈಯೋಫೈಲೈಸ್ಡ್ ಪುಡಿಯನ್ನು ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ;
2. ಲೈಯೋಫೈಲೈಸ್ಡ್ ಪುಡಿಗೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು 25µL ವರೆಗೆ ನೀರನ್ನು ಸೇರಿಸಿ;
3. ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಷನ್ ಮೂಲಕ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಯಂತ್ರದಲ್ಲಿ ರನ್ ಮಾಡಿ.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ:
1. ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಪರೀಕ್ಷೆ: ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ, qPCR ನ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆ.
2. ಯಾವುದೇ ಬಾಹ್ಯ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯಿಲ್ಲ, ಯಾವುದೇ ಬಾಹ್ಯ ಎಂಡೋ/ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಮಾಲಿನ್ಯವಿಲ್ಲ.
ತಾಂತ್ರಿಕ ಮಾಹಿತಿ:
1. ಸೂಪರ್‌ಸ್ಟಾರ್ಟ್ qPCR ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್ ಪ್ಲಸ್-ಯುಎನ್‌ಜಿ ಒಂದು ಕಾದಂಬರಿ ಹಾಟ್-ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ ಅದು 1~5 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ಷಿಪ್ರ ಬಿಸಿ-ಪ್ರಾರಂಭವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ;ವಿಶೇಷ ಬಫರ್ ಸೂತ್ರೀಕರಣದ ಮೂಲಕ ಇದು ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.
2. ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಮಿತಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ, ವರ್ಧನೆ ವಕ್ರಾಕೃತಿಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಮೌಲ್ಯವು ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ಪಷ್ಟ ಸುಧಾರಣೆಯನ್ನು ಪಡೆಯುತ್ತದೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನಾಶೀಲತೆಯ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಪತ್ತೆ ಕಾರಕಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.
3. ಕಡಿಮೆ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ ಅಥವಾ 200bp ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಗೆ, 3-ಹಂತದ ವಿಧಾನವನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
4. ಡಿಯುಟಿಪಿಯ ಬಳಕೆಯ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಯುಎನ್‌ಜಿ ಕಿಣ್ವಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯು ವಿಭಿನ್ನ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗಳಿಗೆ ಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಹೀಗಾಗಿ ಯುಎನ್‌ಜಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುವುದರಿಂದ ಪತ್ತೆ ಸಂವೇದನೆಯಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾದರೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಬೇಕು.ತಾಂತ್ರಿಕ ಬೆಂಬಲ ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ ದಯವಿಟ್ಟು ನಮ್ಮ ಕಂಪನಿಯನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ.
5. ವರ್ಧನೆಯ ಮೊದಲು ಮತ್ತು ನಂತರ ಮೀಸಲಾದ ಪ್ರದೇಶಗಳು ಮತ್ತು ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ, ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕೈಗವಸುಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ;PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಂದ ಮಾದರಿಗಳ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು PCR ಪೂರ್ಣಗೊಂಡ ನಂತರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ತೆರೆಯಬೇಡಿ.
