M-MLV ನಿಯೋಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್

ನಿಯೋಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಎನ್ನುವುದು ಮೊಲೊನಿ ಮುರಿನ್ ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾ ವೈರಸ್ ಮೂಲದ M-MLV ಜೀನ್‌ನ ರೂಪಾಂತರದ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್‌ನಿಂದ ಪಡೆದ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಆಗಿದೆ ಮತ್ತು E.coli ನಲ್ಲಿನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ.ಕಿಣ್ವವು RNase H ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದ ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ-ತಾಪಮಾನದ ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಉನ್ನತ ಮಟ್ಟದ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಸಿಡಿಎನ್‌ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮೇಲೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಅಂಶಗಳ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಇದು ಸಹಾಯಕವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸ್ಥಿರತೆ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಸಿಂಥೆಸಿಸ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಕಿಣ್ವವು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸ್ಥಿರತೆ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಸಿಂಥೆಸಿಸ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಘಟಕಗಳು

1.200 U/μL ನಿಯೋಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್

2.5 × ಮೊದಲ-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಬಫರ್ (ಐಚ್ಛಿಕ)

* 5 × ಫಸ್ಟ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಬಫರ್ dNTP ಅನ್ನು ಹೊಂದಿಲ್ಲ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವಾಗ ದಯವಿಟ್ಟು dNTP ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ

ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಿದ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್

1.ಒಂದು ಹಂತದ qRT-PCR.

2.ಆರ್ಎನ್ಎ ವೈರಸ್ ಪತ್ತೆ.

ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿತಿ

ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ -20 ° C, ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕು, ಆಗಾಗ್ಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.

ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ

ಒಂದು ಘಟಕವು ಪಾಲಿ(A)•oligo(dT) ಬಳಸಿಕೊಂಡು 37°C ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ 1 nmol dTTP ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ₂₅ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್/ಪ್ರೈಮರ್ ಆಗಿ.

ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ

1.SDS-PAGE ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಟಿಕ್ ಶುದ್ಧತೆ 98% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು.

2.ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಸೆನ್ಸಿಟಿವಿಟಿ, ಬ್ಯಾಚ್-ಟು-ಬ್ಯಾಚ್ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಸ್ಥಿರತೆ.

3.ಯಾವುದೇ ಬಾಹ್ಯ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯಿಲ್ಲ, ಬಾಹ್ಯ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಅಥವಾ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಮಾಲಿನ್ಯವಿಲ್ಲ

ಮೊದಲ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಪರಿಹಾರಕ್ಕಾಗಿ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಸೆಟಪ್

1.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ತಯಾರಿಸುವುದು

ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:a/b: ನಿಮ್ಮ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಗತ್ಯಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ದಯವಿಟ್ಟು ವಿವಿಧ ಪ್ರಕಾರದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.

2.65 ° C ನಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯ ಮೇಲೆ ತ್ವರಿತವಾಗಿ ತಣ್ಣಗಾಗಿಸಿ.

3.ಮೇಲಿನ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ಗೆ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಒಟ್ಟು 20µL ಪರಿಮಾಣಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ:

4. ದಯವಿಟ್ಟು ಕೆಳಗಿನ ಷರತ್ತುಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿ:

(1) ರಾಂಡಮ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿದರೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು 25℃ ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳಿಗೆ ಮತ್ತು ನಂತರ 50℃ ನಲ್ಲಿ 30~60 ನಿಮಿಷಗಳಿಗೆ ನಡೆಸಬೇಕು;

(2) Oligo dT ಅಥವಾ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದರೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು 50℃ ನಲ್ಲಿ 30~60 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ನಡೆಸಬೇಕು.

5.ನಿಯೋಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಕೊನೆಗೊಳಿಸಲು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 95℃ ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ.

6.ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಪಿಸಿಆರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಮತ್ತು ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ ಪಿಸಿಆರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್‌ನಲ್ಲಿ ಬಳಸಬಹುದು ಅಥವಾ ದೀರ್ಘಕಾಲ -20℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.

ಪಿಸಿಆರ್ ಆರ್ಕ್ರಿಯೆ:

1.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ತಯಾರಿಸುವುದು

ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:a: ಮೊದಲ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಸೇರಿಸಿದರೆ, PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು.

2.ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವಿಧಾನ

ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು

1.42℃~55℃ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ತಾಪಮಾನ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್‌ಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.

2.ಇದು ಉತ್ತಮ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದ ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ವರ್ಧನೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಆರ್ಎನ್ಎಯ ಸಂಕೀರ್ಣ ರಚನಾತ್ಮಕ ಪ್ರದೇಶಗಳ ಮೂಲಕ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಹಾದುಹೋಗಲು ಇದು ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿದೆ.ಅಲ್ಲದೆ, ಇದುಒಂದು ಹಂತದ ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ RT-PCR ಪತ್ತೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.

3.ವಿವಿಧ ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆ ಕಿಣ್ವಗಳೊಂದಿಗೆ ಉತ್ತಮ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆ ಆರ್ಟಿ-ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.

4.ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆಯ ಒಂದು-ಹಂತದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ RT-PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ, ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪತ್ತೆ ದರವನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ.

5.cDNA ಲೈಬ್ರರಿ ನಿರ್ಮಾಣಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.