ಆರ್ನೇಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್
ಮುರೈನ್ RNase ಪ್ರತಿಬಂಧಕವು ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಮುರಿನ್ RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕವಾಗಿದ್ದು, E.coli ನಿಂದ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಇದು ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಅಲ್ಲದ ಬಂಧದ ಮೂಲಕ 1:1 ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ RNase A, B ಅಥವಾ C ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಮೂರು ಕಿಣ್ವಗಳ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು RNA ಯನ್ನು ಅವನತಿಯಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಇದು ಆಸ್ಪರ್‌ಜಿಲ್ಲಸ್‌ನಿಂದ RNase 1, RNase T1, S1 ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್, RNase H ಅಥವಾ RNase ವಿರುದ್ಧ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿಲ್ಲ.ಮುರೈನ್ RNase ಪ್ರತಿಬಂಧಕವನ್ನು RT-PCR, RT-qPCR ಮತ್ತು IVT mRNA ಯಿಂದ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ವಾಣಿಜ್ಯ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್‌ಗಳು, DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗಳು ಮತ್ತು RNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.
ಮಾನವ RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಮುರಿನ್ RNase ಪ್ರತಿಬಂಧಕವು ಎರಡು ಸಿಸ್ಟೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಇದು ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚು ಸಂವೇದನಾಶೀಲವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರತಿರೋಧಕದ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.ಅದು DTT ಯ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ (1 mM ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ) ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಈ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯವು DTT ಯ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಪ್ರತಿಕೂಲವಾದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಕೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ನೈಜ-ಸಮಯದ RT-PCR).
Aಅರ್ಜಿ
ಆರ್ಎನ್ಎ ಅವನತಿಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು RNase ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಸಾಧ್ಯವಿರುವ ಯಾವುದೇ ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ಈ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು, ಉದಾಹರಣೆಗೆ:
1.cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, ಇತ್ಯಾದಿಗಳ ಮೊದಲ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ನ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ.
2.ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಶನ್/ಅನುವಾದದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ (ಉದಾ, ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ವೈರಲ್ ರೆಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್) RNAಯನ್ನು ಅವನತಿಯಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ.
3.ಆರ್ಎನ್ಎ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ RNase ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧ.
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು -25～- 15 ℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು, ಇದು 2 ವರ್ಷಗಳವರೆಗೆ ಮಾನ್ಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ.
ಶೇಖರಣಾ ಬಫರ್
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT ಮತ್ತು 50% ಗ್ಲಿಸರಾಲ್.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
5ng ರೈಬೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ A ಯ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು 50% ರಷ್ಟು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಮುರಿನ್ RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಒಂದು ಘಟಕ (U) ಎಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕ
ಮುರಿನ್ RNase ಪ್ರತಿಬಂಧಕದ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕವು 50 kDa ಆಗಿದೆ.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:
16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37℃ ನಲ್ಲಿ 1 μg λ -ಹಿಂದ್ III ಡೈಜೆಸ್ಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯೊಂದಿಗೆ 40 ಯು ಮುರೈನ್ ಆರ್ನೇಸ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕವು ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಂತೆ ಯಾವುದೇ ಅವನತಿಯನ್ನು ನೀಡುವುದಿಲ್ಲ.
ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:
16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37℃ ನಲ್ಲಿ 1μg λ ಡಿಎನ್‌ಎಯೊಂದಿಗೆ 40 ಯು ಮುರೈನ್ ಆರ್ನೇಸ್ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವು ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಂತೆ ಯಾವುದೇ ಅವನತಿಯನ್ನು ನೀಡುವುದಿಲ್ಲ.
ನಿಕ್ಕಿಂಗ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:
16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37℃ ನಲ್ಲಿ 1μg pBR322 ನೊಂದಿಗೆ 40U ಮುರಿನ್ RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕವು ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಯಾವುದೇ ಅವನತಿಯನ್ನು ನೀಡುವುದಿಲ್ಲ.
RNase ಚಟುವಟಿಕೆ:
40U ಮುರೈನ್ RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕವು 1.6μg MS2 RNAಯೊಂದಿಗೆ 4h 37℃ ನಲ್ಲಿ ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಂತೆ ಯಾವುದೇ ಅವನತಿಯನ್ನು ನೀಡುವುದಿಲ್ಲ.
E.ಕೋಲಿ ಡಿಎನ್ಎ:
E. coli 16S rRNA ಲೊಕಸ್‌ಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ TaqMan qPCR ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು E. ಕೊಲಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಇರುವಿಕೆಗಾಗಿ 40 U ಮುರಿನ್ RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.E. ಕೋಲಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಮಾಲಿನ್ಯವು ≤ 0.1 pg/40 U.
Nಓಟ್s
1.ಹಿಂಸಾತ್ಮಕ ಆಂದೋಲನ ಅಥವಾ ಸ್ಫೂರ್ತಿದಾಯಕ ಕಿಣ್ವದ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
2.ಈ ಪ್ರತಿರೋಧಕದ ಗರಿಷ್ಠ ತಾಪಮಾನದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯು 25-55 ℃ ಆಗಿತ್ತು, ಮತ್ತು ಇದನ್ನು 65℃ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನದರಲ್ಲಿ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.
3. RNase H, RNase 1 ಮತ್ತು RNase T1 ನ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳನ್ನು ಮುರಿನ್ RNase ಪ್ರತಿಬಂಧಕದಿಂದ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.
4. RNase ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧವು pH ನ ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ (pH 5-9 ಎಲ್ಲಾ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿದೆ), ಮತ್ತು pH 7-8 ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.
5.ರೈಬೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್‌ಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಡಿನಾಟರಿಂಗ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುವುದರಿಂದ, ರೈಬೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಕೀರ್ಣವಾಗಿರುವ ಆರ್ನೇಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ ಅಣುಗಳನ್ನು ಡಿನಾಟ್ಯೂರ್ ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಕಾಳಜಿಯನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಬೇಕು.ಸಕ್ರಿಯ ರೈಬೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್‌ನ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು, 50 °C ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಯೂರಿಯಾ ಅಥವಾ ಇತರ ಡಿನಾಟರಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.
