ವಾರ್ಮ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಬಿಎಸ್ಟಿ 2.0 ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (ಗ್ಲಿಸರಾಲ್ ಮುಕ್ತ)

Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ಅನ್ನು ಬ್ಯಾಸಿಲಸ್ ಸ್ಟೀರೋಥರ್ಮೋಫಿಲಸ್ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ I ನಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ, ಇದು 5′→3′ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಬಲವಾದ ಚೈನ್ ರಿಪ್ಲೇಸ್‌ಮೆಂಟ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ 5′→3′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯಿಲ್ಲ.Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್-ಡಿಸ್ಪ್ಲೇಸ್‌ಮೆಂಟ್, ಐಸೋಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ LAMP (ಲೂಪ್ ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್) ಮತ್ತು ಕ್ಷಿಪ್ರ ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ಎಂಬುದು Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 (HC5005A) ಆಧಾರಿತ ಬಿಸಿ-ಪ್ರಾರಂಭದ ಆವೃತ್ತಿಯಾಗಿದ್ದು, ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಮಾರ್ಪಾಡು ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ರೂಪಿಸಬಹುದು. -ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವರ್ಧನೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಿ, ಮತ್ತು ಈ ಆವೃತ್ತಿಯನ್ನು ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ ಮಾಡಬಹುದು.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಅದರ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಹಂತದ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ.

ಘಟಕಗಳು

Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 (ಗ್ಲಿಸರಾಲ್-ಮುಕ್ತ)(8U/μL)

ಅರ್ಜಿಗಳನ್ನು

1.LAMP ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ವರ್ಧನೆ

2.ಡಿಎನ್ಎ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಏಕ ಸ್ಥಳಾಂತರದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ

3.ಹೆಚ್ಚಿನ GC ಜೀನ್ ಅನುಕ್ರಮ

4.ನ್ಯಾನೊಗ್ರಾಮ್ ಮಟ್ಟದ DNA ಅನುಕ್ರಮ.

ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿತಿ

0 ° C ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಸಾರಿಗೆ ಮತ್ತು -25 ° C ~ -15 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ

ಒಂದು ಘಟಕವನ್ನು 65 ° C ನಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಆಮ್ಲ ಕರಗದ ವಸ್ತುವಿನೊಳಗೆ 25 nmol dNTP ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ

1.ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ಯೂರಿಟಿ ಅಸ್ಸೇ (SDS-PAGE):Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ≥99% ಕೂಮಾಸ್ಸೀ ಬ್ಲೂ ಪತ್ತೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು SDS-PAGE ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

2.Eಎನ್ಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ಚಟುವಟಿಕೆ:37 ℃ ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1 μg λDNA ಜೊತೆಗೆ Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ ಕನಿಷ್ಠ 8 U ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 50 μL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾವು ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವುದಿಲ್ಲ.

3.ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:1 μg λ -ಹಿಂದ್ Ⅲ ಡಿಜೆಸ್ಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37 ℃ ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ ಕನಿಷ್ಠ 8 U ಹೊಂದಿರುವ 50 μL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾವು ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವುದಿಲ್ಲ.

4.ನಿಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:37°C ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1 μg pBR322 DNA ಜೊತೆಗೆ Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ ಕನಿಷ್ಠ 8 U ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 50 μL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾವು ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.

5.RNase ಚಟುವಟಿಕೆ:1.6 μg MS2 RNA ಜೊತೆಗೆ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37 ° C ನಲ್ಲಿ Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ ಕನಿಷ್ಠ 8 U ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 50 μL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾವು ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.

6.E. ಕೊಲಿDNA:E. coli 16S rRNA ಲೊಕಸ್‌ಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ TaqMan qPCR ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು E. ಕೊಲಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಇರುವಿಕೆಗಾಗಿ Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ 120 U ಅನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.E. ಕೊಲಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಮಾಲಿನ್ಯವು ≤1 ನಕಲು ಆಗಿದೆ.

ಲ್ಯಾಂಪ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ

ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:

1) ಎ.SYTOTM 16 ಹಸಿರು (25×): ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಗತ್ಯಗಳ ಪ್ರಕಾರ, ಇತರ ಬಣ್ಣಗಳನ್ನು ಬದಲಿಯಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು;

2) ಬಿ.ಪ್ರೈಮರ್ ಮಿಶ್ರಣ: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ಮತ್ತು ಇತರ ಸಂಪುಟಗಳನ್ನು ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.

ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿತಿ

1 × HC Bst V2 ಬಫರ್, ಕಾವು ತಾಪಮಾನವು 60 ° C ಮತ್ತು 65 ° C ನಡುವೆ ಇರುತ್ತದೆ.

ಶಾಖ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ

 80 ° C, 20 ನಿಮಿಷಗಳು