Bst 2.0 DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (ಗ್ಲಿಸರಾಲ್ ಮುಕ್ತ)
Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ಅನ್ನು ಬ್ಯಾಸಿಲಸ್ ಸ್ಟೀರೋಥರ್ಮೋಫಿಲಸ್ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ I ನಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ, ಇದು 5′→3′ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಬಲವಾದ ಚೈನ್ ರಿಪ್ಲೇಸ್‌ಮೆಂಟ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ 5′→3′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯಿಲ್ಲ.Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್-ಡಿಸ್ಪ್ಲೇಸ್ಮೆಂಟ್, ಐಸೋಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ LAMP (ಲೂಪ್ ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್) ಮತ್ತು ಕ್ಷಿಪ್ರ ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.
ಘಟಕಗಳು
| ಘಟಕ | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNAಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2(ಗ್ಲಿಸರಾಲ್-ಮುಕ್ತ)(8U/μL) | 0.2 ಮಿ.ಲೀ | 1 ಮಿ.ಲೀ | 10 ಮಿ.ಲೀ |
| 10×HC Bst V2 ಬಫರ್ | 1.5 ಮಿ.ಲೀ | 2×1.5 ಮಿಲಿ | 3×10 ಮಿಲಿ |
| MgSO4(100mM) | 1.5 ಮಿ.ಲೀ | 2×1.5 ಮಿಲಿ | 2×10 ಮಿಲಿ |
ಅರ್ಜಿಗಳನ್ನು
1.LAMP ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ವರ್ಧನೆ
2.ಡಿಎನ್ಎ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಸಿಂಗಲ್ ಡಿಸ್ಪ್ಲೇಸ್ಮೆಂಟ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ
3.ಹೈ ಜಿಸಿ ಜೀನ್ ಅನುಕ್ರಮ
4. ನ್ಯಾನೊಗ್ರಾಮ್ ಮಟ್ಟದ ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮ.
ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿತಿ
0 ° C ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಸಾರಿಗೆ ಮತ್ತು -25 ° C ~ -15 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
ಒಂದು ಘಟಕವನ್ನು 65 ° C ನಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಆಮ್ಲ ಕರಗದ ವಸ್ತುವಿನೊಳಗೆ 25 nmol dNTP ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
1.ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ಯೂರಿಟಿ ಅಸ್ಸೇ (SDS-PAGE):Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ≥99% ಕೂಮಾಸ್ಸೀ ಬ್ಲೂ ಪತ್ತೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು SDS-PAGE ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
2.ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:1 μg λ -ಹಿಂದ್ Ⅲ ಡಿಜೆಸ್ಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37 ℃ ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ ಕನಿಷ್ಠ 8 U ಹೊಂದಿರುವ 50 μL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾವು ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವುದಿಲ್ಲ.
3.ನಿಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:37°C ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1 μg pBR322 DNA ಜೊತೆಗೆ Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ ಕನಿಷ್ಠ 8 U ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 50 μL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾವು ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
4.RNase ಚಟುವಟಿಕೆ:1.6 μg MS2 RNA ಜೊತೆಗೆ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37 ° C ನಲ್ಲಿ Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ ಕನಿಷ್ಠ 8 U ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 50 μL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾವು ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
5.E. ಕೊಲಿ DNA:E. coli 16S rRNA ಲೊಕಸ್‌ಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ TaqMan qPCR ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು E. ಕೊಲಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಇರುವಿಕೆಗಾಗಿ Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 ನ 120 U ಅನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.E. ಕೊಲಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಮಾಲಿನ್ಯವು ≤1 ನಕಲು ಆಗಿದೆ.
ಲ್ಯಾಂಪ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ
| ಘಟಕಗಳು | 25μL |
| 10×HC Bst V2 ಬಫರ್ | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTP ಗಳು (10mM ಪ್ರತಿ) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 ಹಸಿರು (25×)a | 1.0 μL |
| ಪ್ರೈಮರ್ ಮಿಶ್ರಣb | 6 μL |
| Bst DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ V2 (ಗ್ಲಿಸರಾಲ್-ಮುಕ್ತ) (8 U/uL) | 1 μL |
| ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ | × μL |
| ddH₂O | 25 μL ವರೆಗೆ |
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:
1) ಎ.SYTOTM 16 ಹಸಿರು (25×): ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಗತ್ಯಗಳ ಪ್ರಕಾರ, ಇತರ ಬಣ್ಣಗಳನ್ನು ಬದಲಿಯಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು;
2) ಬಿ.ಪ್ರೈಮರ್ ಮಿಶ್ರಣ: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ಮತ್ತು ಇತರ ಸಂಪುಟಗಳನ್ನು ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.
ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿತಿ
1 × HC Bst V2 ಬಫರ್, ಕಾವು ತಾಪಮಾನವು 60 ° C ಮತ್ತು 65 ° C ನಡುವೆ ಇರುತ್ತದೆ.
ಶಾಖ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ
80 °C, 20 ನಿಮಿಷಗಳು
