DNA ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಮಿನಿ ಕಿಟ್

ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು

-15 ~ -25℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಸಾಗಿಸಿ.

ಘಟಕಗಳು

ಬಫರ್ GDP:DNA ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಬಫರ್.

ಬಫರ್ GW:ತೊಳೆಯುವ ಬಫರ್;ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಬಾಟಲಿಯ ಮೇಲೆ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಪರಿಮಾಣದ ಮೂಲಕ ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.

ಎಲುಷನ್ ಬಫರ್:ಎಲುಶನ್.

ಫಾಸ್ಟ್‌ಪ್ಯೂರ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಿನಿ ಕಾಲಮ್‌ಗಳು-ಜಿ:DNA ಹೊರಹೀರುವಿಕೆ ಕಾಲಮ್‌ಗಳು.

ಸಂಗ್ರಹಣಾ ಕೊಳವೆಗಳು 2 ಮಿಲಿ:ಫಿಲ್ಟ್ರೇಟ್ಗಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಣಾ ಟ್ಯೂಬ್ಗಳು.

ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ವಸ್ತುಗಳು

1.5 ಮಿಲಿ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ ಮತ್ತು ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್ (ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕು ≤100 ಬಿಪಿ ಮಾಡಿದಾಗ, 1 ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ

ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್ 1 ವಾಲ್ಯೂಮ್ ಜೆಲ್ಗೆ), ನೀರಿನ ಸ್ನಾನ.

ಪ್ರಯೋಗ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ

ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಟ್ಯಾಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಸೂಚಿಸಿದಂತೆ ಬಫರ್ GW ಅನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲು 80 ಮಿಲಿ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.

ಯಾಂತ್ರಿಕತೆ

1. ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರ

ಜೆಲ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಯೋಜನೆ: ಸಮಾನ ಪ್ರಮಾಣದ ಬಫರ್ ಜಿಡಿಪಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರ ಮರುಪಡೆಯುವಿಕೆ ಯೋಜನೆ ಸೇರಿಸಿ:ವಾಲ್ಯೂಮ್ ಬಫರ್‌ನ 5 ಪಟ್ಟು ಸೇರಿಸಿ

2. GDP ಜೆಲ್ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡಿ (100  μl 100 ಮಿಗ್ರಾಂ)

ಜೆಲ್ ಕರಗಿಸಿ

3. 50 ~ 55 ಕ್ಕೆ ಪೂರ್ವಭಾವಿಯಾಗಿ ಕಾಯಿಸಿ℃

4. ಬೈಂಡ್ ವಾಶ್

ಬಫರ್ GDP ಯ 300 μL ಸೇರಿಸಿ*

700 μL ಬಫರ್ GW ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ

700 μL ಬಫರ್ GW ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ

5. ಎಲುಟ್

20 - 30μL ಎಲುಷನ್ ಬಫರ್ ಅಥವಾ ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರನ್ನು ಸೇರಿಸಿ

ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು* ಈ ಹಂತವಿಲ್ಲದೆ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ದ್ರವ ಚೇತರಿಕೆ

ಜೆಲ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಾರ್ಯಕ್ರಮ

1. ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ವಿಭಜಿಸಲು ಡಿಎನ್‌ಎ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ನಂತರ, ಯುವಿ ಬೆಳಕಿನ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಅಗಾರೋಸ್ ಜೆಲ್‌ನಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕಿನ ಏಕೈಕ ಪಟ್ಟಿಯನ್ನು ಅಬಕಾರಿ ಮಾಡಿ.ಜೆಲ್‌ನ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ತೇವಾಂಶವನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳಲು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಕಾಗದವನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನೀವು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಅಗರೋಸ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಮೂಲಕ ಜೆಲ್ ಸ್ಲೈಸ್‌ನ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.ಅದರ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡಲು ಜೆಲ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಅನ್ನು (ಮೈಕ್ರೋಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಇಲ್ಲದೆ) ತೂಗಿಸಿ: 100 mg ಜೆಲ್‌ಲೈಸ್‌ನ ಪರಿಮಾಣವು ಸುಮಾರು 100 μL ಆಗಿರುತ್ತದೆ, ಸಾಂದ್ರತೆಯು 1g/ml ಎಂದು ಊಹಿಸಿ.

2. ಸಮಾನ ಪ್ರಮಾಣದ ಬಫರ್ GDP ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, 7-10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 50~55℃ ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ (ಜೆಲ್ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಕಾರ, ಜೆಲ್ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗುವವರೆಗೆ ಕಾವು ಸಮಯವನ್ನು ಹೊಂದಿಸಿ).ಕಾವು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು 2 ಬಾರಿ ತಿರುಗಿಸಿ.

Δ ಬಫರ್ GDP ಯ 1-3 ಸಂಪುಟಗಳ ಸೇರ್ಪಡೆಯು DNA ಚೇತರಿಕೆಯ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ.ಮರುಪಡೆಯಬೇಕಾದ DNA ತುಣುಕನ್ನು <100 bp ಆಗಿದ್ದರೆ, ಬಫರ್ GDP ಯ 3 ಸಂಪುಟಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿದೆ;ಜೆಲ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗಿದಾಗ, ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್ನ 1 ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ, ನಂತರ ಮುಂದಿನ ಹಂತಕ್ಕೆ ಮುಂದುವರಿಯಿರಿ.

3. ಮಾದರಿಯನ್ನು ಟ್ಯೂಬ್‌ನ ಕೆಳಭಾಗಕ್ಕೆ ತರಲು ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್, FastPure DNA Mini Columns-G ಅನ್ನು ಕಲೆಕ್ಷನ್ ಟ್ಯೂಬ್ಸ್ 2 ml ಗೆ ಸೇರಿಸಿ, 700 μL ಒಮ್ಮೆ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ

ಶೋಧನೆ ಕಾಲಮ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಮಯ, 12,000 rpm (13,800 X g) ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ 30-60 ಸೆಕೆಂಡು.

4. ಫಿಲ್ಟ್ರೇಟ್ ಅನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿ ಮತ್ತು ಕಾಲಮ್‌ಗೆ 300 μL ಬಫರ್ GDP ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 1 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ ಕಾವುಕೊಡಿ, 12,000 rpm (13,800 X g) ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ 30-60 ಸೆಕೆಂಡುಗಳವರೆಗೆ.

5. ಫಿಲ್ಟ್ರೇಟ್ ಅನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿ ಮತ್ತು ಕಾಲಮ್‌ಗೆ 700 μL ಬಫರ್ GW ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಮುಂಚಿತವಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆಯೇ ಎಂದು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ!) 30-60 ಸೆಕೆಂಡ್‌ಗೆ 12,000 rpm (13,800 X g) ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ.

Δ ಆಡ್ಸರ್ಪ್ಶನ್ ಕಾಲಮ್ ಗೋಡೆಯ ಸುತ್ತಲೂ ಬಫರ್ GW ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಅಥವಾ ಬಫರ್ GW ಬ್ಯಾಕ್ ಕವರ್ ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಟ್ಯೂಬ್ ಗೋಡೆಗೆ ಅಂಟಿಕೊಂಡಿರುವ ಉಪ್ಪನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಫ್ಲಶ್ ಮಾಡಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡಲು 2 - 3 ಬಾರಿ ತಲೆಕೆಳಗಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.

6. ಹಂತ 5 ಅನ್ನು ಪುನರಾವರ್ತಿಸಿ.

Δ ಬಫರ್ GW ನೊಂದಿಗೆ ಎರಡು ಬಾರಿ ಫ್ಲಶಿಂಗ್ ಮಾಡುವುದರಿಂದ ಉಪ್ಪನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು ಮತ್ತು ನಂತರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲಿನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು.

7. ಫಿಲ್ಟ್ರೇಟ್ ಅನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿ ಮತ್ತು 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 12,000 rpm (13,800 X g) ನಲ್ಲಿ ಖಾಲಿ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ.

8. ಕ್ಲೀನ್ 1.5 ಮಿಲಿ ಮೈಕ್ರೊಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, 20 - 30 μL ಎಲುಷನ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಕಾಲಮ್ ಮೆಂಬರೇನ್‌ನ ಮಧ್ಯಭಾಗಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಿ, 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ, ತದನಂತರ 1 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 12,000 ಆರ್‌ಪಿಎಂ (13,800 X g) ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ.ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿ, ಪಡೆದ DNA ಅನ್ನು -20 ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.

Δ ಮತ್ತೊಮ್ಮೆ ಎಲುಟ್ ಮಾಡಲು ಹಂತ 8 ರ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸುವುದು ಮತ್ತು ಎಲುಷನ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು 55 ಕ್ಕೆ ಪೂರ್ವಭಾವಿಯಾಗಿ ಕಾಯಿಸುವುದು (ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕು > 3 ಕೆಬಿ ಇದ್ದಾಗ) ಚೇತರಿಕೆ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಸಹಾಯಕವಾಗಬಹುದು.

ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಮರುಪಡೆಯುವಿಕೆ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ

ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು, ಎಂಜೈಮ್ಯಾಟಿಕ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಮತ್ತು ಇತರ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಚ್ಚಾ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಂದ (ಜೆನೆಟಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸೇರಿದಂತೆ) ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ಈ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಪರಿಹಾರವು ವಿವಿಧ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು, ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು, ಪ್ರೈಮರ್ ಡೈಮರ್‌ಗಳು, ಉಪ್ಪು ಅಣುಗಳು, ಕಿಣ್ವಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು.

1. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳು, ಎಂಜೈಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರ, ಮತ್ತು ಇತರ DNA ಕಚ್ಚಾ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು.ಪೈಪೆಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಅವುಗಳ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಅಂದಾಜು ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ 1.5 ಮಿಲಿ ಅಥವಾ 2 ಮಿಲಿ ಟ್ಯೂಬ್ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ.100 μL ವರೆಗೆ ಪರಿಮಾಣದವರೆಗೆ ddH2O ಸೇರಿಸಿ;ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಗಾಗಿ, 300 μL ಗೆ ddH2O ನೊಂದಿಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವುದು ಚೇತರಿಕೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

2. ಬಫರ್ GDP ಯ 5 ಸಂಪುಟಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ವಿಲೋಮ ಅಥವಾ ಸುಳಿಯ ಮೂಲಕ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.ಆಸಕ್ತಿಯ DNA ತುಣುಕು >100 bp ಆಗಿದ್ದರೆ, ಎಥೆನಾಲ್‌ನ ಹೆಚ್ಚುವರಿ 1.5 ಸಂಪುಟಗಳನ್ನು (ಮಾದರಿಗಳು + ಬಫರ್ GDP) ಸೇರಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

3. ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತೆ ಸಂಗ್ರಹಣಾ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಿ, ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ, 12,000 rpm (13,800 ×g) ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ 30 - 60 ಸೆಕೆಂಡುಗಳವರೆಗೆ.ಮಿಶ್ರ ದ್ರಾವಣದ ಪರಿಮಾಣವು >700 µL ಆಗಿದ್ದರೆ, ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತೆ ಸಂಗ್ರಹಣಾ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ಹಾಕಿ, ಉಳಿದ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ ಮತ್ತು 12,000 rpm (13,800 × g) ನಲ್ಲಿ 30 - 60 ಸೆಕೆಂಡ್‌ಗೆ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ.

4. ಮುಂದಿನ ಪ್ರದರ್ಶನವು 08- 1/ಜೆಲ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಾರ್ಯಕ್ರಮದ 5 - 8 ಹಂತವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.