ಮೌಸ್ ಜಿನೋಟೈಪಿಂಗ್ ಕಿಟ್
ಬೆಕ್ಕು ಸಂಖ್ಯೆ: HCR2021A
ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಡಿಎನ್ಎ ಕಚ್ಚಾ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಮೌಸ್ ಜಿನೋಟೈಪ್‌ಗಳ ತ್ವರಿತ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಗಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಕಿಟ್ ಆಗಿದೆ.ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೊಟೀನೇಸ್ ಕೆ ಮೂಲಕ ಸರಳ ಸೀಳುವಿಕೆಯ ನಂತರ ಮೌಸ್ ಟೈಲ್, ಕಿವಿ, ಟೋ ಮತ್ತು ಇತರ ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಂದ ನೇರವಾಗಿ ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.ರಾತ್ರಿಯ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆ ಇಲ್ಲ, ಫೀನಾಲ್-ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಅಥವಾ ಕಾಲಮ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ, ಇದು ಸರಳವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಸಮಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಉತ್ಪನ್ನವು 2kb ವರೆಗಿನ ಗುರಿ ತುಣುಕುಗಳ ವರ್ಧನೆಗೆ ಮತ್ತು 3 ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.2×ಮೌಸ್ ಟಿಶ್ಯೂ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್ ತಳೀಯವಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಂಡ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್, Mg ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ2+, dNTP ಗಳು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸಲು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಬಫರ್ ಸಿಸ್ಟಮ್, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು 1× ಗೆ ಮರುಹೊಂದಿಸುವ ಮೂಲಕ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಬಹುದು.ಈ ಉತ್ಪನ್ನದೊಂದಿಗೆ ವರ್ಧಿಸಿದ PCR ಉತ್ಪನ್ನವು 3′ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖವಾದ "A" ಬೇಸ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ನಂತರ TA ಕ್ಲೋನಿಂಗ್‌ಗೆ ನೇರವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು.
ಘಟಕಗಳು
| ಘಟಕ | ಗಾತ್ರ |
| 2×ಮೌಸ್ ಟಿಶ್ಯೂ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್ | 5×1.0mL |
| ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ | 2×20mL |
| ಪ್ರೊಟೀನೇಸ್ ಕೆ | 800μL |
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು -25~-15℃ ನಲ್ಲಿ 2 ವರ್ಷಗಳವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು.ಕರಗಿದ ನಂತರ, ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಬಹು ಬಳಕೆಗಾಗಿ 2~8℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಬಳಸುವಾಗ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬಹುದು.
ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್
ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಮೌಸ್ ನಾಕ್ಔಟ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, ಟ್ರಾನ್ಸ್ಜೆನಿಕ್ ಪತ್ತೆ, ಜೀನೋಟೈಪಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಮುಂತಾದವುಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.
ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳು
1.ಸರಳ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ: ಜೀನೋಮಿಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ;
2.ವ್ಯಾಪಕ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್: ವಿವಿಧ ಮೌಸ್ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ನೇರ ವರ್ಧನೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.
ಸೂಚನೆಗಳು
1.ಜೀನೋಮಿಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಬಿಡುಗಡೆ
1) ಲೈಸೇಟ್ ತಯಾರಿಕೆ
ಟಿಶ್ಯೂ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಬೇಕಾದ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಟಿಶ್ಯೂ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಡೋಸೇಜ್ ಪ್ರಕಾರ ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿಯೇ ತಯಾರಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಬಳಕೆಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕು), ಮತ್ತು ಒಂದೇ ಮಾದರಿಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಕಾರಕಗಳ ಪ್ರಮಾಣವು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿರುತ್ತದೆ:
| ಘಟಕಗಳು | ಪರಿಮಾಣ (μL) |
| ಪ್ರೊಟೀನೇಸ್ ಕೆ | 4 |
| ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ | 200 |
2) ಮಾದರಿ ತಯಾರಿ ಮತ್ತು ಲೈಸಿಸ್
ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಿದ ಅಂಗಾಂಶ ಬಳಕೆ
| ವಿಧಅಂಗಾಂಶ | ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾದ ಸಂಪುಟ |
| ಮೌಸ್ ಬಾಲ | 1-3ಮಿ.ಮೀ |
| ಮೌಸ್ ಕಿವಿ | 2-5ಮಿ.ಮೀ |
| ಮೌಸ್ ಟೋ | 1-2 ತುಣುಕುಗಳು |
ಕ್ಲೀನ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ತ ಪ್ರಮಾಣದ ಮೌಸ್ ಅಂಗಾಂಶದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ, ಪ್ರತಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ 200μL ತಾಜಾ ಅಂಗಾಂಶ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಸುಳಿ ಮತ್ತು ಶೇಕ್ ಮಾಡಿ, ನಂತರ 55 ° ನಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ, ತದನಂತರ 3 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 98 ℃ ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ.
3) ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ
5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 12,000 ಆರ್‌ಪಿಎಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಲೈಸೇಟ್ ಮತ್ತು ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಅನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಿ.ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಬಹುದು.ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತೊಂದು ಸ್ಟೆರೈಲ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ ಮತ್ತು 2 ವಾರಗಳವರೆಗೆ -20℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.
2.ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆ
-20℃ ನಿಂದ 2×ಮೌಸ್ ಟಿಶ್ಯೂ ಡೈರೆಕ್ಟ್ PCR ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯ ಮೇಲೆ ಕರಗಿಸಿ, ತಲೆಕೆಳಗಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಕೆಳಗಿನ ಕೋಷ್ಟಕದ ಪ್ರಕಾರ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ (ಐಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಿ):
| ಘಟಕಗಳು | 25μLವ್ಯವಸ್ಥೆ | 50μLವ್ಯವಸ್ಥೆ | ಅಂತಿಮ ಏಕಾಗ್ರತೆ |
| 2×ಮೌಸ್ ಟಿಶ್ಯೂ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್ | 12.5μL | 25μL | 1× |
| ಪ್ರೈಮರ್ 1 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| ಪ್ರೈಮರ್ 2 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| ಸೀಳು ಉತ್ಪನ್ನa | ಅಗತ್ಯವಿರುವಂತೆ | ಅಗತ್ಯವಿರುವಂತೆ |
|
| ddH2O | 25μL ವರೆಗೆ | 50μL ವರೆಗೆ |
|
ಸೂಚನೆ:
ಎ) ಸೇರಿಸಿದ ಮೊತ್ತವು ಸಿಸ್ಟಮ್ನ 1/10 ಅನ್ನು ಮೀರಬಾರದು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಸೇರಿಸಿದರೆ, ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು.
ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾದ PCR ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
| ಸೈಕಲ್ ಹೆಜ್ಜೆ | ತಾಪ | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್‌ಗಳು |
| ಆರಂಭಿಕ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 94℃ | 5 ನಿಮಿಷಗಳು | 1 |
| ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 94℃ | 30 ಸೆ | 35-40 |
| ಅನೆಲಿಂಗ್a | Tm+3~5℃ | 30 ಸೆ | |
| ವಿಸ್ತರಣೆ | 72℃ | 30 ಸೆಕೆಂಡ್/ಕೆಬಿ | |
| ಅಂತಿಮ ವಿಸ್ತರಣೆ | 72℃ | 5 ನಿಮಿಷಗಳು | 1 |
| - | 4℃ | ಹಿಡಿದುಕೊಳ್ಳಿ | - |
ಸೂಚನೆ:
ಎ) ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ: ಪ್ರೈಮರ್‌ನ Tm ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಿ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಸಣ್ಣ Tm ಮೌಲ್ಯಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ +3~5℃.
ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಮಸ್ಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಹಾರಗಳು
1.ಯಾವುದೇ ಉದ್ದೇಶಿತ ಪಟ್ಟಿಗಳಿಲ್ಲ
1) ಅತಿಯಾದ ಲೈಸಿಸ್ ಉತ್ಪನ್ನ.ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ತವಾದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಆರಿಸಿ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸಿಸ್ಟಮ್ನ 1/10 ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿಲ್ಲ;
2) ತುಂಬಾ ದೊಡ್ಡ ಮಾದರಿ ಗಾತ್ರ.ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು 10 ಬಾರಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ ಮತ್ತು ನಂತರ ವರ್ಧಿಸಿ, ಅಥವಾ ಮಾದರಿ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಮರು-ಲಿಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ;
3) ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳು ತಾಜಾವಾಗಿಲ್ಲ.ತಾಜಾ ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ;
4) ಕಳಪೆ ಪ್ರೈಮರ್ ಗುಣಮಟ್ಟ.ಪ್ರೈಮರ್ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಲು ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸವನ್ನು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಲು ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಬಳಸಿ.
2.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆ
1) ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸೈಕಲ್ ಸಂಖ್ಯೆಯು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ.ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ ಮತ್ತು ಚಕ್ರಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ;
2) ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ.ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ ಅಥವಾ ವರ್ಧನೆಯ ನಂತರ 10 ಬಾರಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ;
3) ಕಳಪೆ ಪ್ರೈಮರ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ.ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸವನ್ನು ಆಪ್ಟಿಮೈಜ್ ಮಾಡಿ.
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು
1.ಮಾದರಿಗಳ ನಡುವೆ ಅಡ್ಡ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು, ಬಹು ಮಾದರಿ ಉಪಕರಣಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಬಳಕೆಯ ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯ ನಂತರ 2% ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಪೋಕ್ಲೋರೈಟ್ ದ್ರಾವಣ ಅಥವಾ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಕ್ಲೀನರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಉಪಕರಣಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಯನ್ನು ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಬಹುದು.
2.ತಾಜಾ ಮೌಸ್ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆಯ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಮಾದರಿ ಪರಿಮಾಣವು ತುಂಬಾ ದೊಡ್ಡದಾಗಿರಬಾರದು.
3.ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಆಗಾಗ್ಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಬಹು ಬಳಕೆಗಾಗಿ 2~8℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದರೆ, ಮಳೆಯು ಸಂಭವಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗಬೇಕು.
4.PCR ಮಿಶ್ರಣವು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಬಳಕೆಗಾಗಿ 4℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.
5.ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಸಂಶೋಧನೆಗಾಗಿ ಮಾತ್ರ ಮತ್ತು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಅಥವಾ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಬಾರದು.
