ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಒಂದು ಹಂತ RT-qPCR ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್-UNG
ಬೆಕ್ಕು ಸಂಖ್ಯೆ: HCB5145A
ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಒನ್ ಸ್ಟೆಪ್ RT-qPCR ಪ್ರೋಬ್ ಕಿಟ್ (UDG ಪ್ಲಸ್) ಒಂದು ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಕಿಟ್ ಆಗಿದ್ದು RNA ಯನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಆಧರಿಸಿದೆ.ಪ್ರಯೋಗದ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಅನ್ನು ಅದೇ ಟ್ಯೂಬ್ನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು, ಇದು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯನ್ನು ಸರಳಗೊಳಿಸಿತು ಮತ್ತು ಮಾಲಿನ್ಯದ ಅಪಾಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಈ ಕಿಟ್‌ನಲ್ಲಿ, ಮೊದಲ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ cDNA ಅನ್ನು ಶಾಖ-ನಿರೋಧಕ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್‌ನಿಂದ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹಾಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟ್ಯಾಗ್ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನಿಂದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ವರ್ಧಿಸಲಾಗಿದೆ.ಕಿಟ್ ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ MP ಬಫರ್, ಕಿಣ್ವಗಳ ಮಿಶ್ರಣ ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣವು ಈಗಾಗಲೇ Mg ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ2+ಮತ್ತು dNTP.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತಡೆಯುವ ಮತ್ತು ಬಹು qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬಹು ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.ಏರೋಸಾಲ್ ಮಾಲಿನ್ಯದ ಅಪಾಯವನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತಡೆಗಟ್ಟಲು dUTP/UDG ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಘಟಕಗಳು
1. ಬಫರ್
2. ಕಿಣ್ವ ಮಿಶ್ರಣ
ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ
| ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ | ಅಂತರ್ನಿರ್ಮಿತ ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ |
| ಪತ್ತೆ ವಿಧಾನ | ಪ್ರೈಮರ್-ಪ್ರೋಬ್ ಪತ್ತೆ |
| ಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನ | ಒಂದು ಹಂತ RT-qPCR |
| ಪಾಲಿಮರೇಸ್ | Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ |
| ಮಾದರಿಯ ಪ್ರಕಾರ | ಡಿಎನ್ಎ |
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಡ್ರೈ ಐಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ರವಾನಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 1 ವರ್ಷಕ್ಕೆ -25~-15℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.ಇದು ಆಗಾಗ್ಗೆ ತಪ್ಪಿಸಬೇಕುಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ.ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಉಳಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಸೂಚನೆಗಳು
1.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ
| ಘಟಕಗಳು | ಪರಿಮಾಣ (μL) | ಅಂತಿಮ ಏಕಾಗ್ರತೆ |
| 2 × MP ಬಫರ್ | 12.5 | 1× |
| ಕಿಣ್ವ ಮಿಶ್ರಣ | 1 | - |
| ಪ್ರೈಮರ್/ಪ್ರೋಬ್ ಮಿಕ್ಸ್ (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆರ್ಎನ್ಎ | 1-10 | - |
| RNase ಉಚಿತ H2O | 25ಕ್ಕೆ | - |
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:
ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಲು ಮರೆಯದಿರಿ, ಹಿಂಸಾತ್ಮಕ ಕಂಪನದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಅತಿಯಾದ ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಎ.ಪ್ರೈಮರ್ ಏಕಾಗ್ರತೆ: ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಪ್ರೈಮರ್ ಮಿಶ್ರಣ, ಪರಿಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 0.l ಮತ್ತು 1.0μM ನಡುವೆ ಇರಬಹುದು.
ಬಿ.ಪ್ರೋಬ್ ಏಕಾಗ್ರತೆ: ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಪ್ರೋಬ್ ಲೇಬಲಿಂಗ್ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಗ್ರೂಪ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಪ್ರೋಬ್ ಮಿಕ್ಸ್, ಪರಿಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಸೂಕ್ತ ತನಿಖೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 0.05 ಮತ್ತು 0.5μM ನಡುವೆ ಇರಬಹುದು.
ಸಿ.ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ: qPCR ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ನಿಯಂತ್ರಣ Ct ಮೌಲ್ಯವು 20 ಮತ್ತು 35 ರ ನಡುವೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.
ಡಿ.ಸಿಸ್ಟಮ್ ತಯಾರಿ: ದಯವಿಟ್ಟು ಅಲ್ಟ್ರಾ ಕ್ಲೀನ್ ವರ್ಕಿಂಗ್ ಟೇಬಲ್‌ನಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಿ, ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಶೇಷವಿಲ್ಲದೆ ಪೈಪ್ಟರ್ ಮತ್ತು ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಟ್ಯೂಬ್;ಫಿಲ್ಟರ್ ಅಂಶದೊಂದಿಗೆ ಗನ್ ಹೆಡ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಅಡ್ಡ ಮಾಲಿನ್ಯ ಮತ್ತು ಏರೋಸಾಲ್ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
2. ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಸೈಕ್ಲಿಂಗ್ಶಿಷ್ಟಾಚಾರ
| ಸೈಕಲ್ ಹಂತ | ತಾಪ | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್‌ಗಳು |
| ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನ | 50℃ಎ | 20 ನಿಮಿಷಗಳು | 1 |
| ಆರಂಭಿಕ-ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95℃ | 5 ನಿಮಿಷಗಳು | 1 |
| ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ | 95℃ | 15 ಸೆ |
40-45 |
| 60℃ b | 30 ಸೆ c |
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:
ಎ.ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನ: ತಾಪಮಾನವು 42 ° C ಅಥವಾ 50 ° C ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಬಹುದು.
ಬಿ.ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ: ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ Tm ಮೌಲ್ಯಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಸಿ.ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಸ್ವಾಧೀನ: ಉಪಕರಣದ ಕೈಪಿಡಿಯ ಅಗತ್ಯತೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ದಯವಿಟ್ಟು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ವಿಧಾನವನ್ನು ಹೊಂದಿಸಿ.
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು
ನಿಮ್ಮ ಆರೋಗ್ಯ ಮತ್ತು ಸುರಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ದಯವಿಟ್ಟು ಲ್ಯಾಬ್ ಕೋಟ್ ಮತ್ತು ಕೈಗವಸುಗಳಂತಹ ಅಗತ್ಯ PPE ಅನ್ನು ಧರಿಸಿ.
