ಯುರಾಸಿಲ್ ಡಿಎನ್ಎ ಗ್ಲೈಕೋಸೈಲೇಸ್
ಯುರಾಸಿಲ್-ಡಿಎನ್ಎ ಗ್ಲೈಕೋಸೈಲೇಸ್ (UNG ಅಥವಾ UDG) 25 kDa ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದೊಂದಿಗೆ E.coli ಯ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ತದ್ರೂಪವಾಗಿದೆ.ಇದು ಯುರಾಸಿಲ್-ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಮತ್ತು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯಿಂದ ಉಚಿತ ಯುರಾಸಿಲ್ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ವೇಗವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ವಿರುದ್ಧ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಡೆಯಲು ಬಳಸಬಹುದು.ಕ್ರಿಯೆಯ ತತ್ವವು ಪಿಸಿಆರ್ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಡಿಟಿಟಿಪಿಗೆ ಬದಲಿಯಾಗಿ ಡಿಯುಟಿಪಿಯನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ಡಿಯು ಬೇಸ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆ ಉತ್ಪನ್ನವು ರೂಪುಗೊಂಡರೆ, ಕಿಣ್ವವು ಯು ಬೇಸ್‌ಗಳ ಗ್ಲೈಕೋಸಿಡಿಕ್ ಬಂಧವನ್ನು ಏಕ-ತಂತು ಮತ್ತು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಆಯ್ದವಾಗಿ ಮುರಿಯಬಹುದು. ಡಿಎನ್ಎ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಕೆಡಿಸುತ್ತದೆ.
ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಿದ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್
ಮಾಲಿನ್ಯ ತಡೆಗಟ್ಟುವಿಕೆ ವರ್ಧನೆ
ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿತಿ
ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ -20 ° C, ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕು, ಆಗಾಗ್ಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಶೇಖರಣಾ ಬಫರ್
20 mM Tris-HCl (pH 8.0) , 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, ಸ್ಟೇಬಿಲೈಸರ್, 50% ಗ್ಲಿಸರಾಲ್.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
37°C ನಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆಯಲ್ಲಿ dU ಬೇಸ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 1µg ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ವಿಘಟಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣವು 1 ಘಟಕವಾಗಿದೆ.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
1.SDS-PAGE ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಟಿಕ್ ಶುದ್ಧತೆ 98% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು
2.ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಸೆನ್ಸಿಟಿವಿಟಿ, ಬ್ಯಾಚ್-ಟು-ಬ್ಯಾಚ್ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಸ್ಥಿರತೆ
3.1U ಯುಎನ್‌ಜಿಯನ್ನು 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 50℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ನಂತರ, 103 ಪ್ರತಿಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಇರುವ U ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕ್ಷೀಣಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ವರ್ಧನೆಯ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ
4.ಯಾವುದೇ ಬಾಹ್ಯ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಇಲ್ಲ
ಸೂಚನೆಗಳು
| ಘಟಕಗಳು | ಪರಿಮಾಣ (μL) | ಅಂತಿಮ ಏಕಾಗ್ರತೆ |
| 10 × PCR ಬಫರ್ (dNTP ಉಚಿತ, Mg²+ಉಚಿತ) | 5 | 1× |
| dUTP ಗಳು (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP ಬದಲಿಗೆ) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 ಮಿ.ಮೀ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 ಯು |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × ಪ್ರೈಮರ್ ಮಿಕ್ಸ್ಎ | 2 | 1× |
| ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ | - | 1μg/ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ |
| ddH₂O | 50 ಕ್ಕೆ | - |
ಸೂಚನೆ: a: qPCR/qRT-PCR ಗಾಗಿ ಬಳಸಿದರೆ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತನಿಖೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಬೇಕು.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, 0.2 μM ನ ಅಂತಿಮ ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ;ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯು ಕಳಪೆಯಾಗಿರುವಾಗ, ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 0.2-1 μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಸರಿಹೊಂದಿಸಬಹುದು.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ತನಿಖೆಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 0.1-0.3 μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಬ್‌ನ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಏಕಾಗ್ರತೆಯ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಮಾಡಬಹುದು.
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು
1.ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಮೊದಲು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ ಕಲುಷಿತಗೊಂಡ ಡಿಯುಟಿಪಿ ವರ್ಧನೆಯ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಯುಎನ್‌ಜಿ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು, ನಂತರ ಉತ್ಪನ್ನದ ಮಾಲಿನ್ಯದಿಂದಾಗಿ ತಪ್ಪು-ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು.
2.ಮಾಲಿನ್ಯ-ವಿರೋಧಿ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಬೇಕಾದ UNG ಕಿಣ್ವಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ತಾಪಮಾನವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 2 ನಿಮಿಷಗಳಿಗೆ 50℃ ಆಗಿದೆ;ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ ಸ್ಥಿತಿಯು 5 ನಿಮಿಷಗಳಿಗೆ 95 ° ಆಗಿದೆ.
3.ಆಗಾಗ್ಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ ಮತ್ತು ದೊಡ್ಡ ತಾಪಮಾನ ಏರಿಳಿತಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳಬೇಡಿ.
4.ವರ್ಧಿಸಬೇಕಾದ ವಿಭಿನ್ನ ಜೀನ್‌ಗಳು dUTP ಯ ವಿಭಿನ್ನ ಬಳಕೆಯ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು UNG ಕಿಣ್ವಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ, UNG ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಬಳಕೆಯು ಪತ್ತೆ ಸಂವೇದನೆಯಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾದರೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಬೇಕು, ನಿಮಗೆ ತಾಂತ್ರಿಕ ಬೆಂಬಲ ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ ನಮ್ಮ ಕಂಪನಿ.
