Hotstart Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್
ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (ಆಂಟಿಬಾಡಿ ಮಾರ್ಪಾಡು) ಥರ್ಮಸ್ ಅಕ್ವಾಟಿಕಸ್ ವೈಟಿ-1 ನಿಂದ ಬಿಸಿ-ಪ್ರಾರಂಭದ ಥರ್ಮೋಸ್ಟೆಬಲ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಆಗಿದೆ, ಇದು 5′→3′ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು 5´ ಫ್ಲಾಪ್ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಹಾಟ್-ಸ್ಟಾರ್ಟ್ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಒಂದು Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದು ಥರ್ಮೊಬೈಲ್ Taq ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳಿಂದ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ.ಪ್ರತಿಕಾಯ ಮಾರ್ಪಾಡು ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ, ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ ಮತ್ತು ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು.
ಘಟಕಗಳು
| ಘಟಕ | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq ಬಫರ್ | 4×1 ಮಿಲಿ | 4×10 ಮಿಲಿ | 4×50 ಮಿಲಿ | 5×400 ಮಿಲಿ |
| ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (ಆಂಟಿಬಾಡಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ) (5 U/μL) | 0.1 ಮಿ.ಲೀ | 1 ಮಿ.ಲೀ | 5 ಮಿ.ಲೀ | 10×5 ಮಿಲಿ |
ಅರ್ಜಿಗಳನ್ನು
10 mM Tris-HCl (25℃ ನಲ್ಲಿ pH 7.4), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM ಡಿಥಿಯೋಥ್ರೆಟಾಲ್, 0.5% ಟ್ವೀನ್20, 0.5% IGEPALCA-630 ಮತ್ತು 50% ಗ್ಲಿಸರಾಲ್.
ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿತಿ
0 ° C ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಸಾರಿಗೆ ಮತ್ತು -25 ° C ~ -15 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
75 ° C ನಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಆಮ್ಲ ಕರಗದ ವಸ್ತುವಿನೊಳಗೆ 15 nmol dNTP ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ಒಂದು ಘಟಕವನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
1.Endಅಣುಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:37℃ ನಲ್ಲಿ 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 4 μg pUC19 DNA ಜೊತೆಗೆ 20 U ಕಿಣ್ವದ ಕಾವು ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟ DNA ಯ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು.
2.5 ಕೆಬಿ ಲ್ಯಾಂಬ್ಡಾ ಪಿಸಿಆರ್:200 µM dNTPs ಮತ್ತು 0.2 µM ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ 1.25 ಯೂನಿಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ 5 ng ಲ್ಯಾಂಬ್ಡಾ DNA ಯ PCR ವರ್ಧನೆಯ 25 ಚಕ್ರಗಳು ನಿರೀಕ್ಷಿತ 5 kb ಉತ್ಪನ್ನದಲ್ಲಿ ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.
3.ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:10 nmol 5´-FAM ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ 10 nmol 5´-FAM ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ 37℃ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕನಿಷ್ಠ 12.5 U Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 50 µl ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾವು ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಯನ್ನು ನೀಡುವುದಿಲ್ಲ.
4.RNase ಚಟುವಟಿಕೆ:37°C ನಲ್ಲಿ 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1μg ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರತಿಲೇಖನಗಳೊಂದಿಗೆ 20 ಯು ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ 10 µL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾವು ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು.
5.ಶಾಖ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ:ಸಂ.
ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ
| ಘಟಕಗಳು | ಸಂಪುಟ |
| ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್ಎa | ಐಚ್ಛಿಕ |
| 10 μM ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ | 0.5 μL |
| 10 μM ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್ | 0.5 μL |
| dNTP ಮಿಕ್ಸ್ (10mM ಪ್ರತಿ) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq ಬಫರ್ | 5 μL |
| Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ಬಿ(5U/μL) | 0.125 μL |
| ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಮುಕ್ತ ನೀರು | 25 μL ವರೆಗೆ |
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:
1) ಎ.
| ಡಿಎನ್ಎ | ಮೊತ್ತ |
| ಜೀನೋಮಿಕ್ | 1 ng-1 μg |
| ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅಥವಾ ವೈರಲ್ | 1 ಪುಟ-1 ng |
2) ಬಿ.ವಿಶೇಷ ಅನ್ವಯಗಳಲ್ಲಿ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 5-50 ಘಟಕಗಳು/mL (0.1-0.5 ಘಟಕಗಳು/25 µL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ) ವರೆಗೆ ಇರುತ್ತದೆ.
ಥರ್ಮಲ್ ಸೈಕ್ಲಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್
ಪಿಸಿಆರ್
| ಹಂತ | ತಾಪಮಾನ(°C) | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್‌ಗಳು |
| ಆರಂಭಿಕ ಡಿನಾಟರೇಶನ್a | 95 ℃ | 1-3 ನಿಮಿಷಗಳು | - |
| ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95 ℃ | 15-30 ಸೆ | 30-35 ಸೈಕಲ್‌ಗಳು |
| ಅನೆಲಿಂಗ್ಬಿ | 45-68 ℃ | 15-60 ಸೆ | |
| ವಿಸ್ತರಣೆ | 68 ℃ | 1kb/ನಿಮಿಷ | |
| ಅಂತಿಮ ವಿಸ್ತರಣೆ | 68 ℃ | 5 ನಿಮಿಷಗಳು | - |
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:
1) ಹೆಚ್ಚಿನ ವರ್ಧನೆಗಳಿಗೆ 95 ° C ನಲ್ಲಿ 1 ನಿಮಿಷದ ಆರಂಭಿಕ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಸಾಕಾಗುತ್ತದೆ.ಕಷ್ಟಕರವಾದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ, 95 ° C ನಲ್ಲಿ 2-3 ನಿಮಿಷಗಳ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ವಸಾಹತು PCR ನೊಂದಿಗೆ, 95 ° C ನಲ್ಲಿ ಆರಂಭಿಕ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
2) ಅನೆಲಿಂಗ್ ಹಂತವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 15-60 ಸೆ.ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ಪ್ರೈಮರ್ ಜೋಡಿಯ Tm ಅನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 45-68℃ ಆಗಿದೆ.
