ಆರ್ನೇಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ (ಗ್ಲಿಸರಾಲ್ ಮುಕ್ತ)
ಮುರೈನ್ RNase ಪ್ರತಿಬಂಧಕವು ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಮುರಿನ್ RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕವಾಗಿದ್ದು, E.coli ನಿಂದ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಇದು ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಅಲ್ಲದ ಬಂಧದ ಮೂಲಕ 1:1 ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ RNase A, B ಅಥವಾ C ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಮೂರು ಕಿಣ್ವಗಳ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು RNA ಯನ್ನು ಅವನತಿಯಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಇದು ಆಸ್ಪರ್‌ಜಿಲ್ಲಸ್‌ನಿಂದ RNase 1, RNase T1, S1 ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್, RNase H ಅಥವಾ RNase ವಿರುದ್ಧ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿಲ್ಲ.ಮುರೈನ್ RNase ಪ್ರತಿಬಂಧಕವನ್ನು RT-PCR, RT-qPCR ಮತ್ತು IVT mRNA ಯಿಂದ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ವಾಣಿಜ್ಯ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್‌ಗಳು, DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗಳು ಮತ್ತು RNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.
ಮಾನವ RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಮುರಿನ್ RNase ಪ್ರತಿಬಂಧಕವು ಎರಡು ಸಿಸ್ಟೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಇದು ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚು ಸಂವೇದನಾಶೀಲವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರತಿರೋಧಕದ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.ಅದು DTT ಯ ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ (1 mM ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ) ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಈ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯವು DTT ಯ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಪ್ರತಿಕೂಲವಾದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಕೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ನೈಜ-ಸಮಯದ RT-PCR).
Aಅರ್ಜಿ
ಆರ್ಎನ್ಎ ಅವನತಿಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು RNase ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಸಾಧ್ಯವಿರುವ ಯಾವುದೇ ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ಈ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು, ಉದಾಹರಣೆಗೆ:
1.ಫಸ್ಟ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ cDNA ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ, RT-PCR, RT-qPCR, ಇತ್ಯಾದಿ;
2.ಇನ್-ವಿಟ್ರೋ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಶನ್/ಅನುವಾದದಲ್ಲಿ ಅವನತಿಯಿಂದ ಆರ್ಎನ್ಎ ರಕ್ಷಿಸಿ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ವಿಟ್ರೋದಲ್ಲಿ ವೈರಲ್ ರೆಪ್ಲಿಕೇಶನ್);
3.ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ RNase ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧ.
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
-25～-15℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ;
ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ ಚಕ್ರಗಳು ≤ 5 ಬಾರಿ;
1 ವರ್ಷಗಳವರೆಗೆ ಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
RNase A ಯ 5 ng ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು 50% ರಷ್ಟು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕದ ಮೊತ್ತ ಎಂದು ಒಂದು ಘಟಕವನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕ
RNase ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ (ಗ್ಲಿಸರಾಲ್-ಫ್ರೀ) 50 kDa ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದೆ.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:
40 U ಕಿಣ್ವವನ್ನು 1 μg λ-ಹಿಂದ್ III ಡೈಜೆಸ್ಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯೊಂದಿಗೆ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಡಿಎನ್ಎ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು.
ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:
40 U ಕಿಣ್ವವನ್ನು 1 μg λ ಡಿಎನ್‌ಎಯೊಂದಿಗೆ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವು ಮಾಡುವುದರಿಂದ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟ DNA ಯ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿ ಉಂಟಾಗಲಿಲ್ಲ.
ನಿಕ್ಕಿಂಗ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:
37℃ ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1 μg pBR322 ನೊಂದಿಗೆ 40 U ಕಿಣ್ವದ ಕಾವು ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟ DNA ಯ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು.
RNase ಚಟುವಟಿಕೆ:
37℃ ನಲ್ಲಿ 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1.6 μg MS2 RNA ಯೊಂದಿಗೆ 40 U ಕಿಣ್ವದ ಕಾವು ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲ್ಪಟ್ಟ RNA ಯ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು.
E.ಕೋಲಿ ಡಿಎನ್ಎ:
TaqMan qPCR ನಿಂದ 40 U ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗುತ್ತದೆ.E.coli DNA ≤ 0. 1pg/40U.
Nಓಟ್s
1.ಕಿಣ್ವ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯವಾಗುವುದನ್ನು ತಡೆಯಲು ಅಲುಗಾಡಬೇಡಿ ಅಥವಾ ಹಿಂಸಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಬೆರೆಸಬೇಡಿ.
2.RNase ಪ್ರತಿರೋಧಕವು 25℃ ನಿಂದ 55℃ ವರೆಗಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ≥65℃ ನಲ್ಲಿ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.
3.RNase H, RNase 1, ಮತ್ತು RNase T1 ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವುದಿಲ್ಲ.
4. RNase ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ pH ಶ್ರೇಣಿಯು ವಿಶಾಲವಾಗಿದೆ (pH 5-9 ನಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿದೆ), pH 7-8 ನಲ್ಲಿ ಗರಿಷ್ಠ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ.
