ಪ್ರೋಟೀನೇಸ್ K NGS (ಪುಡಿ)
ಬೆಕ್ಕು ಸಂಖ್ಯೆ: HC4507A
NGS ಪ್ರೋಟೀಸ್ K ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ವ್ಯಾಪಕ ತಲಾಧಾರದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾದ ಸೆರೈನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಆಗಿದೆ. ಕಿಣ್ವವು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳು, ಸಲ್ಫರ್-ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳು ಮತ್ತು ಆರೊಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳ C-ಟರ್ಮಿನಲ್‌ನ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿರುವ ಎಸ್ಟರ್ ಬಂಧಗಳು ಮತ್ತು ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಆದ್ಯತೆಯಾಗಿ ಕೊಳೆಯುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಣ್ಣ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳಾಗಿ ವಿಘಟಿಸಲು ಇದನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.NGS ಪ್ರೋಟೀಸ್ K ಎಂಬುದು Asp ನೊಂದಿಗೆ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಸೆರೈನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಆಗಿದೆ39-ಅವನ69-ಸರ್224ವೇಗವರ್ಧಕ ಟ್ರೈಡ್ ಇದು ಸೆರಿನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್‌ಗಳಿಗೆ ವಿಶಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ವೇಗವರ್ಧಕ ಕೇಂದ್ರವು ಟವ್ Ca ನಿಂದ ಆವೃತವಾಗಿದೆ2+ಸ್ಥಿರೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಸೈಟ್‌ಗಳು, ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವುದು.
ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ
| ಗೋಚರತೆ | ಬಿಳಿಯಿಂದ ಆಫ್-ಬಿಳಿ ಅಸ್ಫಾಟಿಕ ಪುಡಿ, ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ |
| ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಚಟುವಟಿಕೆ | ≥40U/mg ಘನ |
| DNase | ಯಾವುದೂ ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ |
| RNase | ಯಾವುದೂ ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ |
| ಬಯೋಬರ್ಡನ್ | ≤50CFU/g ಘನ |
| ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಶೇಷ | <5pg/mg ಘನ |
ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು
| ಮೂಲ | ಟ್ರಿಟಿರಾಚಿಯಮ್ ಆಲ್ಬಮ್ |
| EC ಸಂಖ್ಯೆ | 3.4.21.64(ಟ್ರಿಟಿರಾಚಿಯಂ ಆಲ್ಬಂನಿಂದ ಮರುಸಂಯೋಜಕ) |
| ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕ | 29kDa (SDS-PAGE) |
| ಐಸೊಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಪಾಯಿಂಟ್ | 7.81 Fig.1 |
| ಆಪ್ಟಿಮಮ್ pH | 7.0-12.0 (ಎಲ್ಲರೂ ಹೆಚ್ಚಿನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತಾರೆ) Fig.2 |
| ಅತ್ಯುತ್ತಮ ತಾಪಮಾನ | 65℃ Fig.3 |
| pH ಸ್ಥಿರತೆ | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) Fig.4 |
| ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆ | 50℃ ಕೆಳಗೆ (pH 8.0, 30 ನಿಮಿಷ) Fig.5 |
| ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿರತೆ | 12ತಿಂಗಳವರೆಗೆ 25℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ Fig.6 |
| ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್‌ಗಳು | SDS, ಯೂರಿಯಾ |
| ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳು | ಡೈಸೊಪ್ರೊಪಿಲ್ ಫ್ಲೋರೋಫಾಸ್ಫೇಟ್;ಬೆಂಜೈಲ್ಸಲ್ಫೋನಿಲ್ ಫ್ಲೋರೈಡ್ |
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
ಲೈಯೋಫೈಲೈಸ್ಡ್ ಪುಡಿಯನ್ನು -25~-15 ℃ ನಲ್ಲಿ ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಬೆಳಕಿನಿಂದ ದೂರವಿಡಿ;ವಿಸರ್ಜನೆಯ ನಂತರ, ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ ಅಲಿಕ್ವಾಟ್ ಅನ್ನು 2-8℃ ಬೆಳಕಿನಿಂದ ದೂರದಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ -25~-15 ℃ ಬೆಳಕಿನಿಂದ ದೂರದಲ್ಲಿ ಇಡಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಮುನ್ನಚ್ಚರಿಕೆಗಳು
ಬಳಸುವಾಗ ಅಥವಾ ತೂಕ ಮಾಡುವಾಗ ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಕೈಗವಸುಗಳು ಮತ್ತು ಕನ್ನಡಕಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿ ಮತ್ತು ಬಳಕೆಯ ನಂತರ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಗಾಳಿ ಇರಿಸಿ.ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಚರ್ಮದ ಅಲರ್ಜಿಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಮತ್ತು ಗಂಭೀರವಾದ ಕಣ್ಣಿನ ಕಿರಿಕಿರಿಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು.ಉಸಿರಾಡಿದರೆ, ಅದು ಅಲರ್ಜಿ ಅಥವಾ ಆಸ್ತಮಾ ಲಕ್ಷಣಗಳು ಅಥವಾ ಡಿಸ್ಪ್ನಿಯಾವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು.ಉಸಿರಾಟದ ಕಿರಿಕಿರಿಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
NGS ಪ್ರೋಟೀಸ್ K ಯ ಒಂದು ಘಟಕವನ್ನು ಪ್ರಮಾಣಿತ ನಿರ್ಣಯದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ 1 μmol L-ಟೈರೋಸಿನ್ ಆಗಿ ಕ್ಯಾಸೀನ್ ಅನ್ನು ಹೈಡ್ರೊಲೈಜ್ ಮಾಡಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಕಾರಕಗಳ ತಯಾರಿ
| ಕಾರಕ | ತಯಾರಕ | ಕ್ಯಾಟಲಾಗ್ |
| ಕೇಸೀನ್ ತಾಂತ್ರಿಕಗೋವಿನ ಹಾಲಿನಿಂದ | ಸಿಗ್ಮಾ ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್ | C7078 |
| NaOH | ಸಿನೋಫಾರ್ಮ್ ರಾಸಾಯನಿಕರೀಜೆಂಟ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. | 10019762 |
| NaH2PO4·2H2O | ಸಿನೋಫಾರ್ಮ್ ರಾಸಾಯನಿಕರೀಜೆಂಟ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. | 20040718 |
| Na2HPO4 | ಸಿನೋಫಾರ್ಮ್ ರಾಸಾಯನಿಕರೀಜೆಂಟ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. | 20040618 |
| ಟ್ರೈಕ್ಲೋರೋಅಸೆಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ | ಸಿನೋಫಾರ್ಮ್ ರಾಸಾಯನಿಕರೀಜೆಂಟ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. | 80132618 |
| ಸೋಡಿಯಂ ಅಸಿಟೇಟ್ | ಸಿನೋಫಾರ್ಮ್ ರಾಸಾಯನಿಕರೀಜೆಂಟ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. | 10018818 |
| ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ | ಸಿನೋಫಾರ್ಮ್ ರಾಸಾಯನಿಕರೀಜೆಂಟ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. | 10000218 |
| HCl | ಸಿನೋಫಾರ್ಮ್ ರಾಸಾಯನಿಕರೀಜೆಂಟ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. | 10011018 |
| ಸೋಡಿಯಂ ಕಾರ್ಬೋನೇಟ್ | ಸಿನೋಫಾರ್ಮ್ ರಾಸಾಯನಿಕರೀಜೆಂಟ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. | 10019260 |
| ಫೋಲಿನ್-ಫೀನಾಲ್ | ಸಾಂಗೋನ್ ಬಯೋಟೆಕ್ (ಶಾಂಘೈ)ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. | A500467-0100 |
| ಎಲ್-ಟೈರೋಸಿನ್ | ಸಿಗ್ಮಾ | 93829 |
ಕಾರಕ I:
ತಲಾಧಾರ: ಗೋವಿನ ಹಾಲಿನ ದ್ರಾವಣದಿಂದ 1% ಕ್ಯಾಸಿನ್: 1 ಗ್ರಾಂ ಗೋವಿನ ಹಾಲಿನ ಕ್ಯಾಸೀನ್ ಅನ್ನು 50 ಮಿಲಿ 0.1M ಸೋಡಿಯಂ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಿ, pH 8.0, ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ 65-70 ° C ನಲ್ಲಿ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ, ಬೆರೆಸಿ ಮತ್ತು ಕರಗಿಸಿ, ನೀರಿನಿಂದ ತಣ್ಣಗಾಗಿಸಿ, ಸರಿಹೊಂದಿಸಿ ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ ಅನ್ನು pH 8.0 ಗೆ ಮತ್ತು 100ml ಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ.
ಕಾರಕ II:
TCA ದ್ರಾವಣ: 0.1M ಟ್ರೈಕ್ಲೋರೋಅಸೆಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ, 0.2M ಸೋಡಿಯಂ ಅಸಿಟೇಟ್ ಮತ್ತು 0.3M ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ (ತೂಕ 1.64g ಟ್ರೈಕ್ಲೋರೋಅಸೆಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ + 1.64g ಸೋಡಿಯಂ ಅಸಿಟೇಟ್ + 1.724mL ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ, 50mL ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರಿಗೆ ಸೇರಿಸಿ, 50mL ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರಿಗೆ, H4 ಡೀಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರಿಗೆ, H4 100 ಮಿಲಿ).
ಕಾರಕ III:
0.4m ಸೋಡಿಯಂ ಕಾರ್ಬೋನೇಟ್ ದ್ರಾವಣ (4.24g ಅನ್‌ಹೈಡ್ರಸ್ ಸೋಡಿಯಂ ಕಾರ್ಬೋನೇಟ್ ತೂಕ ಮತ್ತು 100mL ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಿ)
ಕಾರಕ IV:
ಫೋಲಿನ್ ಫೀನಾಲ್ ಕಾರಕ: ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರಿನಿಂದ 5 ಬಾರಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ.
ಕಾರಕ ವಿ:
ಕಿಣ್ವದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ: 0.1 M ಸೋಡಿಯಂ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ದ್ರಾವಣ, pH 8.0.
ಕಾರಕ VI:
L-ಟೈರೋಸಿನ್ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪರಿಹಾರ:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-ಟೈರೋಸಿನ್ 0.2M HCl ನೊಂದಿಗೆ ಕರಗುತ್ತದೆ.
ವಿಧಾನ
1. UV-Vis ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಅನ್ನು ಆನ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಮಾಪನವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.
2. ತರಂಗಾಂತರವನ್ನು 660nm ಎಂದು ಹೊಂದಿಸಿ.
3. ನೀರಿನ ಸ್ನಾನವನ್ನು ಆನ್ ಮಾಡಿ, ತಾಪಮಾನವನ್ನು 37℃ ಗೆ ಹೊಂದಿಸಿ, 3-5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ತಾಪಮಾನವು ಬದಲಾಗದೆ ಇರುವಂತೆ ನೋಡಿಕೊಳ್ಳಿ.
4. 0.5mL ತಲಾಧಾರವನ್ನು 2mL ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ 37℃ ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಪೂರ್ವಭಾವಿಯಾಗಿ ಕಾಯಿಸಿ.
5. 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಪೂರ್ವಭಾವಿಯಾಗಿ ಕಾಯಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುವ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ 0.5mL ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿದ ಕಿಣ್ವದ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಿರಿ.ಎಂಜೈಮ್ ಡಿಲ್ಯೂಯೆಂಟ್ ಅನ್ನು ಖಾಲಿ ಗುಂಪಿನಂತೆ ಹೊಂದಿಸಿ.
6. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಂತರ ತಕ್ಷಣವೇ 1.0 mL TCA ಕಾರಕವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.
7. ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರ.
8. ನಿರ್ದಿಷ್ಟಪಡಿಸಿದ ಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಕೆಳಗಿನ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.
| ಕಾರಕ | ಸಂಪುಟ |
| ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ | 0.5 ಮಿ.ಲೀ |
| 0.4M ಸೋಡಿಯಂ ಕಾರ್ಬೋನೇಟ್ | 2.5 ಮಿ.ಲೀ |
| ಫೋಲಿನ್ ಫೀನಾಲ್ ಕಾರಕ | 0.5 ಮಿ.ಲೀ |
9. 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37℃ ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡುವ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.
10. OD660OD ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು1;ಖಾಲಿ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು: OD ಅನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಕಿಣ್ವದ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಬದಲಿಸಲು ಕಿಣ್ವದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ660OD ನಂತೆ2, ΔOD=OD1-ಓಡಿ2.
11. L-ಟೈರೋಸಿನ್ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಕರ್ವ್: 0.5mL ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ L-ಟೈರೋಸಿನ್ ದ್ರಾವಣ, 2.5mL 0.4M ಸೋಡಿಯಂ ಕಾರ್ಬೋನೇಟ್, 5mL ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ 0.5mL ಫೋಲಿನ್ ಫೀನಾಲ್ ಕಾರಕ, 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37℃ ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ, OD ಗಾಗಿ ಪತ್ತೆ ಮಾಡಿ660L-ಟೈರೋಸಿನ್‌ನ ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಾಗಿ, ನಂತರ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ Y=kX+b ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇಲ್ಲಿ Y ಎಂಬುದು L-ಟೈರೋಸಿನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ, X ಎಂಬುದು OD600.
ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ
2: ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರದ ಒಟ್ಟು ಪರಿಮಾಣ (mL)
0.5: ಕಿಣ್ವದ ದ್ರಾವಣದ ಪ್ರಮಾಣ (mL)
0.5: ಕ್ರೋಮೋಜೆನಿಕ್ ನಿರ್ಣಯದಲ್ಲಿ (mL) ಬಳಸುವ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ದ್ರವ ಪರಿಮಾಣ
10: ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಸಮಯ (ನಿಮಿಷ)
Df: ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಬಹು
C: ಕಿಣ್ವದ ಸಾಂದ್ರತೆ (mg/mL)
ಅಂಕಿ
Fig.1 DNA ಶೇಷ
| ಮಾದರಿ | ಏವ್ C4 | ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಚೇತರಿಕೆ (pg/mg) | ಚೇತರಿಕೆ(%) | ಒಟ್ಟು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA-ಮುಕ್ತ H2O | ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ | - | - | - |
Fig.2 ಆಪ್ಟಿಮಮ್ pH
Fig.3 ಅತ್ಯುತ್ತಮ ತಾಪಮಾನ
Fig.4 pH ಸ್ಥಿರತೆ
Fig.5 ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆ
Fig.6 25℃ ನಲ್ಲಿ ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿರತೆ
