2×ಸೆನ್ಸಿ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪ್ರಿಮಿಕ್ಸ್-UNG (ಪ್ರೋಬ್ qPCR)
ಬೆಕ್ಕು ಸಂಖ್ಯೆ: HCB5151A
ಸೆನ್ಸಿಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್-ಯುಎನ್ಜಿ (ಪ್ರೋಬ್ ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್) ಅನ್ನು ಡಿಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಅಥವಾ ಮಾದರಿ ತಯಾರಿಕೆಯಿಲ್ಲದೆ ನೇರವಾಗಿ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಪಿಸಿಆರ್ ನಿರ್ವಹಿಸಲು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.ಈ ಕಾರಕವು ಹಾಟ್-ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್, ಯುರಾಸಿಲ್ ಡಿಎನ್ಎ ಗ್ಲೈಕೋಸೈಲೇಸ್ (ಯುಎನ್ಜಿ), ಆರ್ನೇಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್, ಎಂಜಿಸಿಎಲ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ2, dNTP ಗಳು (dTTP ಬದಲಿಗೆ dUTP ಜೊತೆಗೆ), ಮತ್ತು ಸ್ಟೆಬಿಲೈಜರ್ಗಳು, ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR (qPCR).ಈ ಕಾರಕವು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ-ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಗಂಟಲಿನ ಸ್ವ್ಯಾಬ್, ಲಾಲಾರಸ, ಆಂಟಿ-ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಸಂಪೂರ್ಣ ರಕ್ತ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯದೆ ಸೀರಮ್ಗಳಂತಹ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಇದನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಅನ್ವಯಿಸಬಹುದು.ಕಾರಕವು qPCR ಗಾಗಿ ಸ್ವಾಮ್ಯದ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಕ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಮತ್ತು UNG ಕಿಣ್ವದ ಮಿಶ್ರ ಕಿಣ್ವಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಳಸುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಇದು ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಗುರಿ ಜೀನ್ಗಳ ಉತ್ತಮ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು ಮತ್ತು PCR ಉಳಿಕೆ ಮತ್ತು ಏರೋಸಾಲ್ ಮಾಲಿನ್ಯದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ.ಈ ಕಾರಕವು ಅಪ್ಲೈಡ್ ಬಯೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್, ಎಪ್ಪೆಂಡಾರ್ಫ್, ಬಯೋ-ರಾಡ್, ರೋಚೆ ಮತ್ತು ಮುಂತಾದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಉಪಕರಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.
ಘಟಕಗಳು
1. 50×SensiDirect ಕಿಣ್ವ/UNG ಮಿಕ್ಸ್
2. 2×SensiDirect ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್ ಬಫರ್ (dUTP)
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಶೇಖರಣೆಗಾಗಿ ಎಲ್ಲಾ ಘಟಕಗಳನ್ನು -20℃ ಮತ್ತು 3 ತಿಂಗಳವರೆಗೆ 4℃ ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಬೇಕು.ದಯವಿಟ್ಟು ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಕರಗಿಸಿ ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ನಂತರ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.ಆಗಾಗ್ಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಸೈಕ್ಲಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್
ಹಂತ | ತಾಪಮಾನ | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್ |
ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆ | 50℃ | 2ನಿಮಿ | 1 |
ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ | 95℃ | 1-5 ನಿಮಿಷ | 1 |
ಡೆನೇಚರ್ | 95℃ | 10-20 ಸೆ | 40-50 |
ಅನೆಲಿಂಗ್/ವಿಸ್ತರಣೆ | 56-64℃ | 20-60 ಸೆ |
ಪೈಪ್ಟಿಂಗ್ ಸೂಚನೆಗಳು
ಕಾರಕ | ಸಂಪುಟ ಪ್ರತಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ | ಪ್ರತಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಪರಿಮಾಣ | ಅಂತಿಮ ಏಕಾಗ್ರತೆ |
2×SensiDirect ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್ ಬಫರ್ (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
50×SensiDirect ಕಿಣ್ವ/UNG ಮಿಕ್ಸ್ | 0.5µL | 1µL | 1× |
25×ಪ್ರೈಮರ್-ಪ್ರೋಬ್ ಮಿಕ್ಸ್1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
ಮಾದರಿ3, 4 | - | - | - |
ddH2O | - | - | - |
ಒಟ್ಟು ಪರಿಮಾಣ | 25 μL | 50 μL | - |
1. ಪ್ರೈಮರ್ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 0.2μM ಆಗಿದೆ.ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗಾಗಿ, ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 0.2-1μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಬಹುದು.
2. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ತನಿಖೆಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 0.1-0.3μM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಬಹುದು.ಪ್ರೋಬ್ನ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪಿಸಿಆರ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉಪಕರಣ, ತನಿಖೆಯ ಪ್ರಕಾರ ಮತ್ತು ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಲೇಬಲಿಂಗ್ ವಸ್ತುವಿನ ಪ್ರಕಾರಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.ದಯವಿಟ್ಟು ಉಪಕರಣದ ಕೈಪಿಡಿ ಅಥವಾ ಪ್ರತಿ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪ್ರೋಬ್ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳನ್ನು ನೋಡಿ.
3. ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಕಾರದ ಮಾದರಿಗಳು ವಿವಿಧ ಪ್ರಕಾರಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರೋಧಕದ ವಿಷಯವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಗುರಿ ಜೀನ್ನ ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.ಮಾದರಿ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ನೈಜ ಸ್ಥಿತಿಯಿಂದ ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕು.ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್-ಮುಕ್ತ ನೀರು ಅಥವಾ TE ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮಾದರಿಯನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ.
4. ವಿವಿಧ ಮಾದರಿಗಳ ಶಿಫಾರಸು ಪರಿಮಾಣ:
ಮಾದರಿ | ಒಂದು 50 ಕ್ಕೆ ಸಂಪುಟ μL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ | ಗರಿಷ್ಠ ಅನುಪಾತ |
ಹೆಪ್ಪುರೋಧಕ ಸಂಪೂರ್ಣ ರಕ್ತ | 2.5 μL | 5% |
ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ | 15 μL | 30% |
ಸೀರಮ್ | 10 μL | 20% |
ಗಂಟಲಿನ ಸ್ವ್ಯಾಬ್ | 10 μL | 20% |
ಲಾಲಾರಸ | 10 μL | 20% |
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
1. ಕಾರ್ಯ ಪತ್ತೆ: qPCR ನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತನೆ.
2. ಯಾವುದೇ ಬಾಹ್ಯ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಇಲ್ಲ: ಬಾಹ್ಯ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಮತ್ತು ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಮಾಲಿನ್ಯವಿಲ್ಲ.
ಉತ್ಪನ್ನದ ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು
1. ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಹೊಸ ರೀತಿಯ ಹಾಟ್-ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು 1-5 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು. ಅದರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಿರುವುದರಿಂದ, ಪ್ರೋಬ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡಬಲ್ ಅಥವಾ ಮಲ್ಟಿಪಲ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ ಪಿಸಿಆರ್ಗೆ ಇದು ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.
2. PCR ವರ್ಧನೆಯ Rn ಮೌಲ್ಯವು ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆಯಿದ್ದರೆ ಅಥವಾ ವರ್ಧನೆಯು ನಿಸ್ಸಂಶಯವಾಗಿ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಿದರೆ, ಮಾದರಿ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದು, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದು ಅಥವಾ ಮಾದರಿಯ ಹಿಂದಿನ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು.
3. ರಕ್ತ, ಲಾಲಾರಸ, ಮೂತ್ರ, ಗಂಟಲು ಸ್ವ್ಯಾಬ್, ಇತ್ಯಾದಿಗಳ ಸಂಗ್ರಹವು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಮಾನದಂಡಗಳ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅವನತಿಯನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ತಾಜಾ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.
4. ವಿಭಿನ್ನ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್ಗಳು ಡಿಯುಟಿಪಿಗೆ ವಿಭಿನ್ನ ಬಳಕೆಯ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಯುಎನ್ಜಿಗೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದರಿಂದ, ಯುಎನ್ಜಿ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಬಳಸುವಾಗ ಪತ್ತೆ ಸಂವೇದನೆ ಕಡಿಮೆಯಾದರೆ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಬೇಕು.ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ ತಾಂತ್ರಿಕ ಬೆಂಬಲಕ್ಕಾಗಿ ನಮ್ಮನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ.
5. ಒಂದು ಹಂತದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ನಡುವೆ ಕ್ಯಾರಿಓವರ್ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು, ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಮೀಸಲಾದ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರದೇಶ ಮತ್ತು ಪೈಪೆಟ್ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.ಕೈಗವಸುಗಳೊಂದಿಗೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಿ ಮತ್ತು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ನಂತರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ತೆರೆಯಬೇಡಿ.