ವೈಲ್ಡ್ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್
Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಥರ್ಮಸ್ ಅಕ್ವಾಟಿಕಸ್ YT-1 ನಿಂದ ಥರ್ಮೋಸ್ಟೆಬಲ್ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಆಗಿದೆ, ಇದು 5′→3′ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು 5´ ಫ್ಲಾಪ್ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.
ಘಟಕಗಳು
| ಘಟಕ | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq ಬಫರ್ | 2×1 ಮಿಲಿ | 2×10 ಮಿಲಿ | 2×50 ಮಿಲಿ | 5×200 ಮಿಲಿ |
| Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (5 U/μL) | 0.1 ಮಿ.ಲೀ | 1 ಮಿ.ಲೀ | 5 ಮಿ.ಲೀ | 5×10 ಮಿಲಿ |
ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿತಿ
0 ° C ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಸಾರಿಗೆ ಮತ್ತು -25 ° C ~ -15 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
75 ° C ನಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಆಮ್ಲ ಕರಗದ ವಸ್ತುವಿನೊಳಗೆ 15 nmol dNTP ಅನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ಒಂದು ಘಟಕವನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ
1.ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ಯೂರಿಟಿ ಅಸ್ಸೇ (SDS-PAGE):Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು SDS-PAGE ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ≥95% ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿದೆ.
2.Endಅಣುಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:37 ℃ ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1 μg λDNA ಯೊಂದಿಗೆ ಕನಿಷ್ಠ 5 U Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
3.ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:1 μg λ -ಹಿಂದ್ Ⅲ 37 ℃ ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಟಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಕನಿಷ್ಠ 5 ಯು ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
4.ನಿಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ:37°C ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1 μg pBR322 DNA ನೊಂದಿಗೆ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಕನಿಷ್ಠ 5 U ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
5.RNase ಚಟುವಟಿಕೆ:37°C ನಲ್ಲಿ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 1.6 μg MS2 RNA ಜೊತೆ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಕನಿಷ್ಠ 5 U ನಿರ್ಧರಿಸಿದಂತೆ ಯಾವುದೇ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
6.E. ಕೊಲಿDNA:E. ಕೊಲಿ 16S rRNA ಲೊಕಸ್‌ಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ TaqMan qPCR ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು E. ಕೋಲಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಇರುವಿಕೆಗಾಗಿ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ 5 U ಅನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.E. ಕೊಲಿ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಮಾಲಿನ್ಯವು ≤1 ನಕಲು ಆಗಿದೆ.
7.ಪಿಸಿಆರ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ (5.0 ಕೆಬಿ ಲ್ಯಾಂಬ್ಡಾ ಡಿಎನ್ಎ)- PCR ವರ್ಧನೆಯ 25 ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ 5 ಘಟಕಗಳೊಂದಿಗೆ 5 ng ಲ್ಯಾಂಬ್ಡಾ DNA ಹೊಂದಿರುವ 50 µL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ನಿರೀಕ್ಷಿತ 5.0 kb ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.
ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಸೆಟಪ್
| ಘಟಕಗಳು | ಸಂಪುಟ |
| ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್ಎa | ಐಚ್ಛಿಕ |
| 10 μM ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ | 1 μL |
| 10 μM ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್ | 1 μL |
| dNTP ಮಿಕ್ಸ್ (10mM ಪ್ರತಿ) | 1 μL |
| 10×ಟಾಕ್ ಬಫರ್ | 5 μL |
| Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ಬಿ | 0.25 μL |
| ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಮುಕ್ತ ನೀರು | 50 μL ವರೆಗೆ |
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:
1) ವಿಭಿನ್ನ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ.ಕೆಳಗಿನ ಕೋಷ್ಟಕವು 50 µL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಬಳಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
| ಡಿಎನ್ಎ | ಮೊತ್ತ |
| ಜೀನೋಮಿಕ್ | 1 ng-1 μg |
| ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅಥವಾ ವೈರಲ್ | 1 ಪುಟ-1 ng |
2) ವಿಶೇಷ ಅನ್ವಯಗಳಲ್ಲಿ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 0.25 µL~1 µL ವರೆಗೆ ಇರುತ್ತದೆ.
ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಕಾರ್ಯಕ್ರಮ
| ಹಂತ | ತಾಪಮಾನ(°C) | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್‌ಗಳು |
| ಆರಂಭಿಕ ಡಿನಾಟರೇಶನ್a | 95 ℃ | 5 ನಿಮಿಷಗಳು | - |
| ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | 95 ℃ | 15-30 ಸೆ | 30-35 ಸೈಕಲ್‌ಗಳು |
| ಅನೆಲಿಂಗ್ಬಿ | 60 ℃ | 15 ಸೆ | |
| ವಿಸ್ತರಣೆ | 72 ℃ | 1kb/ನಿಮಿಷ | |
| ಅಂತಿಮ ವಿಸ್ತರಣೆ | 72 ℃ | 5 ನಿಮಿಷಗಳು | - |
ಟಿಪ್ಪಣಿಗಳು:
1) ಆರಂಭಿಕ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಸ್ಥಿತಿಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ರಚನೆಯ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಬಹುದು.ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ರಚನೆಯು ಸಂಕೀರ್ಣವಾಗಿದ್ದರೆ, ಆರಂಭಿಕ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಪೂರ್ವ-ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಸಮಯವನ್ನು 5 - 10 ನಿಮಿಷಗಳವರೆಗೆ ವಿಸ್ತರಿಸಬಹುದು.
2) ಪ್ರೈಮರ್‌ನ Tm ಮೌಲ್ಯಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ, ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ನ Tm ಮೌಲ್ಯಕ್ಕಿಂತ 3~5 ℃ ಕಡಿಮೆಗೆ ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ;ಸಂಕೀರ್ಣ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸುವುದು ಮತ್ತು ಸಮರ್ಥ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಸಮಯವನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸುವುದು ಅವಶ್ಯಕ.
