ಪ್ರೋಟೀನೇಸ್ K mNGS (ದ್ರವ)
ಪ್ರೋಟೀನೇಸ್ ಕೆ ವಿಶಾಲವಾದ ತಲಾಧಾರದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾದ ಸೆರೈನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಆಗಿದೆ.ಇದು ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿಯೂ ಸಹ ಸ್ಥಳೀಯ ರಾಜ್ಯದಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಕೆಡಿಸುತ್ತದೆ.ಸ್ಫಟಿಕ ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ರಚನೆಯ ಅಧ್ಯಯನಗಳ ಪುರಾವೆಗಳು ಕಿಣ್ವವು ಸಕ್ರಿಯ ಸೈಟ್ ವೇಗವರ್ಧಕ ಟ್ರೈಡ್ (Asp) ಹೊಂದಿರುವ ಸಬ್ಟಿಲಿಸಿನ್ ಕುಟುಂಬಕ್ಕೆ ಸೇರಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.39-ಅವನ69-ಸರ್224)ನಿರ್ಬಂಧಿಸಲಾದ ಆಲ್ಫಾ ಅಮೈನೋ ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಲಿಫಾಟಿಕ್ ಮತ್ತು ಆರೊಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳ ಕಾರ್ಬಾಕ್ಸಿಲ್ ಗುಂಪಿನ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿರುವ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಬಂಧವು ಸೀಳುವಿಕೆಯ ಪ್ರಧಾನ ತಾಣವಾಗಿದೆ.ಅದರ ವಿಶಾಲವಾದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಗಾಗಿ ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ಪ್ರೋಟೀನೇಸ್ K ವಿಶೇಷವಾಗಿ mNGS ಗಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನೇಸ್ K ಯೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಅದೇ ಕಿಣ್ವಕ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯೊಂದಿಗೆ ಇದು ಕಡಿಮೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ mNGS ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ.
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು
2 ವರ್ಷಗಳವರೆಗೆ 2-8℃
ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ
| ಗೋಚರತೆ | ಬಣ್ಣರಹಿತದಿಂದ ತಿಳಿ ಕಂದು ದ್ರವ |
| ಚಟುವಟಿಕೆ | ≥800 U/ml |
| ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ | ≥20 ಮಿಗ್ರಾಂ/ಮಿಲಿ |
| ನಿಕೇಸ್ | ಯಾವುದೂ ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ |
| DNase | ಯಾವುದೂ ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ |
| RNase | ಯಾವುದೂ ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ |
ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು
| EC ಸಂಖ್ಯೆ | 3.4.21.64(ಟ್ರಿಟಿರಾಚಿಯಂ ಆಲ್ಬಂನಿಂದ ಮರುಸಂಯೋಜಕ) |
| ಐಸೊಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಪಾಯಿಂಟ್ | 7.81 |
| ಆಪ್ಟಿಮಮ್ pH | 7.0- 12.0 ಚಿತ್ರ 1 |
| ಅತ್ಯುತ್ತಮ ತಾಪಮಾನ | 65 ℃ ಚಿತ್ರ 2 |
| pH ಸ್ಥಿರತೆ | pH 4.5- 12.5 (25 ℃, 16 h) ಚಿತ್ರ 3 |
| ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆ | 50 ℃ ಕೆಳಗೆ (pH 8.0, 30 ನಿಮಿಷ) ಚಿತ್ರ 4 |
| ಶೇಖರಣಾ ಸ್ಥಿರತೆ | 25 ℃ ನಲ್ಲಿ 12 ತಿಂಗಳವರೆಗೆ 90% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಚಟುವಟಿಕೆ |
| ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್‌ಗಳು | SDS, ಯೂರಿಯಾ |
| ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳು | ಡೈಸೊಪ್ರೊಪಿಲ್ ಫ್ಲೋರೋಫಾಸ್ಫೇಟ್;ಫಿನೈಲ್ಮೆಥೈಲ್ಸಲ್ಫೋನಿಲ್ ಫ್ಲೋರೈಡ್ |
ಅರ್ಜಿಗಳನ್ನು
1. ಜೆನೆಟಿಕ್ ಡಯಾಗ್ನೋಸ್ಟಿಕ್ ಕಿಟ್
2. RNA ಮತ್ತು DNA ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಿಟ್‌ಗಳು
3. ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಲ್ಲದ ಘಟಕಗಳ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ, ಡಿಎನ್‌ಎಯಂತಹ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕಲ್ಮಶಗಳ ಅವನತಿಲಸಿಕೆಗಳು ಮತ್ತು ಹೆಪಾರಿನ್ ತಯಾರಿಕೆ
4. ಪಲ್ಸ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಮೂಲಕ ಕ್ರೋಮೋಸೋಮ್ ಡಿಎನ್ಎ ತಯಾರಿಕೆ
5. ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್
6. ವಿಟ್ರೊ ರೋಗನಿರ್ಣಯದಲ್ಲಿ ಎಂಜೈಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಗ್ಲೈಕೋಸೈಲೇಟೆಡ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್ ಕಾರಕಗಳು
ಮುನ್ನಚ್ಚರಿಕೆಗಳು
ಬಳಸುವಾಗ ಅಥವಾ ತೂಕ ಮಾಡುವಾಗ ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಕೈಗವಸುಗಳು ಮತ್ತು ಕನ್ನಡಕಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿ ಮತ್ತು ಬಳಕೆಯ ನಂತರ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಗಾಳಿ ಇರಿಸಿ.ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಚರ್ಮದ ಅಲರ್ಜಿಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಮತ್ತು ಗಂಭೀರವಾದ ಕಣ್ಣಿನ ಕಿರಿಕಿರಿಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು.ಉಸಿರಾಡಿದರೆ, ಅದು ಅಲರ್ಜಿ ಅಥವಾ ಆಸ್ತಮಾ ಲಕ್ಷಣಗಳು ಅಥವಾ ಡಿಸ್ಪ್ನಿಯಾವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು.ಉಸಿರಾಟದ ಕಿರಿಕಿರಿಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು.
ಘಟಕದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ
ಒಂದು ಘಟಕ (U) ಅನ್ನು 1 μmol ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಕ್ಯಾಸೀನ್ ಅನ್ನು ಹೈಡ್ರೊಲೈಜ್ ಮಾಡಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ ಎಂದು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲಾಗಿದೆ.ಕೆಳಗಿನ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ ಟೈರೋಸಿನ್.
ಕಾರಕಗಳ ತಯಾರಿ
ಕಾರಕ I: 1g ಹಾಲಿನ ಕ್ಯಾಸೀನ್ ಅನ್ನು 50ml 0.1M ಸೋಡಿಯಂ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ (pH 8.0) ಕರಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, 65-70 ℃ ನೀರಿನಲ್ಲಿ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಕಲಕಿ ಮತ್ತು ಕರಗಿಸಿ, ನೀರಿನಿಂದ ತಂಪಾಗಿಸಿ, ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್‌ನಿಂದ pH 8.0 ಗೆ ಸರಿಹೊಂದಿಸಿ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರ ಪರಿಮಾಣ 100 ಮಿಲಿ.
ಕಾರಕ II: 0.1M ಟ್ರೈಕ್ಲೋರೋಅಸೆಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ, 0.2M ಸೋಡಿಯಂ ಅಸಿಟೇಟ್, 0.3M ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ.
ಕಾರಕ III: 0.4M Na2CO3ಪರಿಹಾರ.
ಕಾರಕ IV: ಫೋರಿಂಟ್ ಕಾರಕವನ್ನು ಶುದ್ಧ ನೀರಿನಿಂದ 5 ಬಾರಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಕಾರಕ V: ಕಿಣ್ವದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ: 0.1M ಸೋಡಿಯಂ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ದ್ರಾವಣ (pH 8.0).
ಕಾರಕ VI: ಟೈರೋಸಿನ್ ದ್ರಾವಣ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml ಟೈರೋಸಿನ್ 0.2 ನೊಂದಿಗೆ ಕರಗುತ್ತದೆM HCl
ವಿಧಾನ
1. 0.5ml ಕಾರಕ I ಅನ್ನು 37℃ ಗೆ ಪೂರ್ವ-ಬೆಚ್ಚಗಾಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, 0.5ml ಕಿಣ್ವ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಕಾವುಕೊಡಿ10 ನಿಮಿಷಗಳಿಗೆ 37℃.
2. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಲು 1ml ಕಾರಕ II ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು ಮುಂದುವರಿಸಿ.
3. ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರ.
4. 0.5ml ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ, 2.5ml ಕಾರಕ III, 0.5ml ಕಾರಕ IV ಸೇರಿಸಿ, ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 37℃ ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ30 ನಿಮಿಷಗಳವರೆಗೆ.
5. ಒಡಿ660OD ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು1;ಖಾಲಿ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು: ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಬದಲಿಸಲು 0.5ml ಕಾರಕ V ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆOD ಅನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಪರಿಹಾರ660OD ನಂತೆ2, ΔOD=OD1-ಓಡಿ2.
6. L-ಟೈರೋಸಿನ್ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್: 0.5mL ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ L-ಟೈರೋಸಿನ್ ದ್ರಾವಣ, 2.5mL ಕಾರಕ III, 5mL ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ 0.5mL ರೀಜೆಂಟ್ IV, 37℃ ನಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ, OD ಗಾಗಿ ಪತ್ತೆ ಮಾಡಿ660L-ಟೈರೋಸಿನ್‌ನ ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಾಗಿ, ನಂತರ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ Y=kX+b ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇಲ್ಲಿ Y ಎಂಬುದು L-ಟೈರೋಸಿನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ, X ಎಂಬುದು OD600.
ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ
2: ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರದ ಒಟ್ಟು ಪರಿಮಾಣ (mL)
0.5: ಕಿಣ್ವದ ದ್ರಾವಣದ ಪ್ರಮಾಣ (mL)
0.5: ಕ್ರೋಮೋಜೆನಿಕ್ ನಿರ್ಣಯದಲ್ಲಿ (mL) ಬಳಸುವ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ದ್ರವ ಪರಿಮಾಣ
10: ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಸಮಯ (ನಿಮಿಷ)
Df: ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಬಹು
C: ಕಿಣ್ವದ ಸಾಂದ್ರತೆ (mg/mL)
ಉಲ್ಲೇಖಗಳು
1. ವೈಗರ್ ಯು & ಹಿಲ್ಜ್ ಎಚ್. ಎಫ್ಇಬಿಎಸ್ ಲೆಟ್.(1972);23:77.
2. ವೀಗರ್ ಯು & ಹಿಲ್ಜ್ ಎಚ್. ಬಯೋಕೆಮ್.ಬಯೋಫಿಸ್.ರೆಸ್.ಕಮ್ಯೂನ್.(1971);44:513.
3. ಹಿಲ್ಜ್, ಎಚ್.ಮತ್ತು ಇತರರು,ಯುರ್.J. ಬಯೋಕೆಮ್.(1975);56:103–108.
4. ಸಂಬ್ರೂಕ್ ಜೆet ಅಲ್., ಆಣ್ವಿಕ ಕ್ಲೋನಿಂಗ್: ಎ ಲ್ಯಾಬೋರೇಟರಿ ಮ್ಯಾನ್ಯುಯಲ್, 2 ನೇ ಆವೃತ್ತಿ, ಕೋಲ್ಡ್ ಸ್ಪ್ರಿಂಗ್ ಹಾರ್ಬರ್ಲ್ಯಾಬೋರೇಟರಿ ಪ್ರೆಸ್, ಕೋಲ್ಡ್ ಸ್ಪ್ರಿಂಗ್ ಹಾರ್ಬರ್ (1989).
ಅಂಕಿ
ಚಿತ್ರ.1 ಆಪ್ಟಿಮಮ್ pH
100mM ಬಫರ್ ಪರಿಹಾರ:pH6.0-8.0, Na-ಫಾಸ್ಫೇಟ್;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, ಗ್ಲೈಸಿನ್-NaOH. ಕಿಣ್ವದ ಸಾಂದ್ರತೆ: 1mg/mL
Fig.2 ಅತ್ಯುತ್ತಮ ತಾಪಮಾನ
20 mM K-ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ pH 8.0 ರಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ.ಕಿಣ್ವದ ಸಾಂದ್ರತೆ: 1 mg/mL
Fig.3 pH ಸ್ಥಿರತೆ
25 ℃, 50 mM ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ 16 h-ಚಿಕಿತ್ಸೆ: pH 4.5- 5.5, ಅಸಿಟೇಟ್;pH 6.0-8.0, ನಾ-ಫಾಸ್ಫೇಟ್;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0- 12.5, ಗ್ಲೈಸಿನ್-NaOH.ಕಿಣ್ವದ ಸಾಂದ್ರತೆ: 1 mg/mL
Fig.4 ಥರ್ಮಲ್ ಸ್ಥಿರತೆ
50 mM Tris-HCl ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ 30 ನಿಮಿಷ-ಚಿಕಿತ್ಸೆ, pH 8.0.ಕಿಣ್ವದ ಸಾಂದ್ರತೆ: 1 mg/mL
Fig.5 ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಸ್ಥಿರತೆty at 25℃
